利用TAIL2PCR和RT2PCR技术克隆云芝植酸酶基因3.PDF

应用与环境生物学报 　2006, 12 ( 5) : 618 ～622 　 　 C h in J A pp l E n viron B io l = ISSN 1006 687X 　 　 利用 TA IL PCR 和 RTPCR 技术克隆云芝植酸酶基因 1, 4 1, 2 3 1, 2 杨 帆 　林俊芳 　苗灵凤 　郭丽琼 ( 1中国热带农业科学院热带作物生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室 　海口　57 1101) (2华南农业大学食品学院生物工程系 　广州 　510640) ( 3右江民族医学院　广西百色 　533000) (4 中国科学院成都生物研究所 　成都 　6 1004 1) ( ) 摘 　要 　从采绒革盖菌 Coriolus vers icolor,常被称为杂色云芝 中筛选到产植酸酶基因. 根据植酸酶基因的保守序列设 计引物 P1、P2 ,从云芝中分离克隆植酸酶基因的片段. 再在分离到的已知序列的 5 端′和 3 端′设计嵌套的特异引物 SP1、SP2、SP3和 SP1 ′、SP2 ′、SP3 ′,利用 TA IL PCR 技术进行分离已知序列的侧翼序列. 结合 B lastn、ORF和 Prim er 5. 0软件 ,在侧翼序列上设计特异引物 P3、P4 ,最终从云芝中分离克隆到全长的植酸酶基因 B4. 再在 B4序列的基础上设 计引物 p hyP rt1、phyP rt2 ,利用这两个引物通过 R TPCR 技术从云芝中克隆到全长的植酸酶基因 B 5. 通过分析 ,分离克 隆到的植酸酶基因可能是新的基因. 图 4 参 12 关键词 　云芝 ; 植酸酶 ; TA IL PCR; R TPCR CL C　Q785 Q949. 329. 7 C lon ing of Phy ta se Gene from C or io lu s versico lor by TA IL PCR and RTPCR 1, 4 1, 2 3 1, 2 YAN G Fan , L IN Junfang , M IAO L ingfeng GUO L iqiong ( 1 S ta te Key L abora tory of B iotechnology of Trop ica l Crops, Institue of Trop ica l B ioscience and B iotechnology,