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VG染色法 主讲：李磊 姜明星 原理 VG染色法是利用两种阴离子染料混合或先或后作用而完成鉴别染色的。 胶原纤维呈红色（被丽春红所染）肌纤维呈黄色（被苦味酸所染），这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。组织的渗透性，取决于组织的结构密度，如细致观察，会发现组织和细胞成分都是多孔的构造。 不同的组织和细胞成分，它们的空隙大小是不同的，空隙的大小，决定了组织的渗透性，如空隙小，组织结构致密，渗透性低；空隙宽，组织结构疏松，渗透性高。 如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色，则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染。由此说明红细胞对阴离子染料的渗透性最小。肌纤维与胞质次之，而胶原纤维具有最大的渗透性。 根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。 染料分子的大小，主要由其分子量来体现。一般来说小分子量者易于穿透结构致密，渗透性低的组织，而大分子染料只能进入结构疏松，渗透性高的组织。 常用胶原纤维染色而几种阴离子染料的分子量由小到大分别是： 苦味酸（黄色），分子量229.11 橙黄G（橙黄色）分子量452 丽春红（红色）分子量480.42 酸性品红（红色）分子量585.53 苯胺蓝（蓝色）分子量737.72 亮绿（绿色）分子量792.72 甲基蓝（蓝色）分子量799 因此,在Van Gieson氏法中,苦味酸染红细胞和肌纤维,酸性品红染胶原纤维。 【试剂配置】 （1）Ponceau染色液 0.5%ponceau(丽春红S)水溶液10-15ml，苦味酸饱和水溶液85-90ml。 （2）Victoria Blue’B染色液 Victoria Blue’B（维多利亚蓝B）0.5g，70%乙醇100ml。 【染色步骤】 （1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。 （2）70%乙醇稍洗后，浸入Victoria Blue’B染色液中15ml。 （3）95%乙醇中分化数秒钟。 （4）用蒸馏水洗2次 （5）用Ponceau染色液滴染5min。 （6）直接用无水乙醇分化与脱水。 （7）二甲苯透明，中性树胶封固。 注意事项： （1）胶原纤维切片的厚度需6um，使之对比清晰。 （2） Victoria Blue’B染色液应盛染色缸内，进行浸染色。 （3）Ponceau染色后，不能与水接触，直接用无水乙醇冲洗脱水。 在Van Gieson氏染色,苦味酸与酸性品红浓的比例若不恰当,如苦味酸的浓度太高,小分子量 染料苦味酸占优势,则结构致密的胞浆,肌纤维和结构疏松的胶原纤维都会被苦味酸所着染。这点是要注意的。 应用 胶原纤维和肌纤维的鉴别染色是病理组织制片的一个重要方法,它的染色对病理诊断很有帮助。 1.来源于间胚叶的肿瘤,如纤维瘤、平滑肌瘤、横纹肌瘤、神经纤维瘤甚至它们的肉瘤等都产生一定的纤维,这些纤维在H-E染色中都染成红色而难以区别。通过用上述方法染色,一般可区分出该肿瘤组织是胶原纤维源性,还是肌源性,或者是神经纤维源性。对于后者,有时还需加染磷 钨酸苏木素来协助诊断。 2.在慢性炎症,机化和瘢痕形成中,可随病理过程的发展而出现胶原纤维。在早期,H-E染色切片中的这些纤维往往和纤维蛋白很难鉴别,通过胶原纤维染色则可证实。如慢性肾小球肾炎的肾小球纤维化后,V.G.染色呈红色。大叶性肺炎或血栓发生机化后,原有的纤维蛋白灶内出现胶原纤维,V.G.染色呈红色。风湿性肉芽肿已静止时,阿啸夫氏(Aschoffs)。巨细胞消失,病灶内的纤维被胶原纤维取代,V.G.染色也呈红色。胃、十二指肠溃疡愈复时,在渍疡底部出现胶原纤维构成的疤痕,慢性阑尾炎时阑尾壁出现的纤维化,肝硬化时胶原纤维的增生,这些用V.G。染色也都染成红色。 3.血管壁的胶原纤维染色对病理诊断也很重要。良性高血压,小动脉的玻璃样变,V.G.染色阳性。恶性高血压病时,小动脉管壁为纤维素样坏死,V.G.染色阴性而纤维素染色阳性 4．V.G.染色对是高血压性血管疾患还是淀粉性样变血管损害的鉴别也很重要。H-E染色的玻璃样变和淀粉样变有时很难区别，用V.G.染色和淀粉样物质染色则可作出区别。如高血压性肾固缩其小动脉壁V染色呈红色。而淀粉样物质沉积的小动脉壁V.G.染色呈黄色。 * * 染色效果如下图 肌肉组织呈黄色 胶原纤维呈红色 *