利用双向电泳技术分离节瓜叶片总蛋白的方法研究-华南农业大学学报.PDFVIP

　华南农业大学学报　２０１４，３５（３）：７９８５ ｈｔｔｐ： ｘｕｅｂａｏ．ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ∥ 　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　　　　　　　　　　　　　　ｄｏｉ：１０．７６７１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１４１１Ｘ．２０１４．０３．０１５ 赵　芹，谢大森，彭庆务，等．利用双向电泳技术分离节瓜叶片总蛋白的方法研究［Ｊ］．华南农业大学学报，２０１４，３５（３）：７９８５． 利用双向电泳技术分离节瓜叶片总蛋白的方法研究 赵　芹，谢大森，彭庆务，郭巨先，周　念 （广东省农业科学院蔬菜研究所，广东广州５１０６４０） 摘要：【目的】建立适合节瓜叶片蛋白质组学研究的双向电泳体系．【方法】以节瓜品种“Ａ３７毛节瓜”为材料，对蛋 白质抽提方法、上样量、凝胶浓度及ＩＰＧ胶条ｐＨ范围等关键因素进行探索与优化．【结果和结论】与ＴＣＡ／丙酮沉 淀法及酚提取法相比，改良酚提取法抽提蛋白质总量较高，纯度最高，ＳＤＳＰＡＧＥ电泳条带明显、清晰，双向电泳图 谱蛋白质点最多、清晰均匀、纵横条纹少．利用１７ｃｍｐＨ４～７范围ＩＰＧ胶条、１２０ ｇ蛋白质上样量、１２％凝胶浓度， μ 硝酸银染色获得蛋白质点数丰富、分辨率高、背景清晰且重复性好的双向电泳图谱，检测到节瓜叶片蛋白质点１９３６ 个，相对分子质量主要分布于１５０００～１０００００之间．初步建立了一套适用于节瓜叶片蛋白质组学研究的双向电泳 体系，为后续开展蛋白质组学研究及其相关工作奠定了基础． 关键词：节瓜；叶片总蛋白；蛋白质组学；双向电泳 中图分类号：Ｓ３３６　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００１４１１Ｘ（２０１４）０３００７９０７ Ａｎｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｓｔｕｄｙｏｎｔｗｏｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｆｏｒｃｈｉｅｈｑｕａ ｌｅａｆｐｒｏｔｅｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓ ＺＨＡＯＱｉｎ，ＸＩＥＤａｓｅｎ，ＰＥＮＧＱｉｎｇｗｕ，ＧＵＯＪｕｘｉａｎ，ＺＨＯＵＮｉａｎ （ＶｅｇｅｔａｂｌｅＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｗｏｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（２ＤＥ）ｓｙｓｔｅｍｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｃｈｉｅｈｑｕａ ｌｅａｆｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖａｒｉｏｕｓｐｒｏｔｅｉｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆ２ＤＥｗｅｒｅｉｎｔｅｒ ｃｏｍｐａｒｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆ“Ａ３７ｍａｏｊｉｅｇｕａ”ａｓｔｈｅｍａｔｅｒｉａｌｓ，ａｎｄｔｈｅｌｏａｄｉｎｇｑｕａｎｔｉｔｙｏｆｓａｍｐｌｅ，ＳＤＳ ＰＡＧＥｇｅｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｐＨｒａｎｇｅｏｆＩＰＧｓｔｒｉｐｓｗｅｒｅａｌｓｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄａｎｄｏｐｔｉｍｉｚｅｄ．【Ｒｅｓｕｌｔａｎｄ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｍｏｄｉｆｉｅｄｐｈｅｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓｎｏｔａｂｌｙｓｕｐｅｒｉｏｒｔｏＴＣＡ／ａｃｅ ｔｏｎｅｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｐｈｅｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｉｎｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｑｕａｌｉｔｙａｎｄｃｌａｒｉｔｙｏｆｐｒｏｔｅｉｎｂａｎｄｓ ｉｎＳＤＳＰＡＧＥｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ａｎｄｔｈｅｆｉｎａｌ２ＤＥｉｍａｇｅｍａｐｂａｓｅｄｏｎｍｏｄｉｆｉｅｄｐｈｅｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ ｈａｄｔｈｅｍａｘｉｕｍｐｒｏｔ