小鼠B7一H4重组蛋白的表达及鉴定.PDF

第38卷第2期 浙江大学学报(医学版) V0138 No2 OF JOURNALZHEJIANG 2009鱼 UNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) 2009 http：∥WWW．journals．zju．edu．en／med 小鼠B7一H4重组蛋白的表达及鉴定 2，古丽娟1，陶 岚1，张立煌1 钱韵1，姚航平2，程林芳2，沈玲 (1．浙江大学免疫学研究所，浙江杭州310058； 2．浙江大学医学院附属第一医院，浙江杭州310003) [摘要]目的：构建小鼠B7一H4胞外区基因的真核表达载体，转染酵母细胞以表达mB7．H4，并 I和EcoR 检测其生物学活性。方法：以roB7一H4的重组质粒为模板，在克隆引物上加入X^D I酶切 I和EcoR 位点，并用PCR方法扩增得到roB7一H4胞外区的基因片段，经X^DI双酶切后接入酵母表 酵母细胞，用PCR、WesternBlot及EI，1SA等方法检测重组基因的表达，并鉴定表达蛋白的生物学 的分泌。结论：成功构建了roB7一H4真核表达系统，并获得了有生物学活性的roB7一H4分子。 [关键词]遗传载体；重组蛋白质类；roB7一H4；重组；表达；免疫抑制 392 [中图分类号]R [文献标识码]A andidentificationofrecombinantmouseB7-H4 Expression gene Yunl，YAO QIAN Li—juanl，TAOLanl， Hang—pin92，CHENGLin—fan92，SHENLin92，GU ZHANG of 310058，China； Li—huan91(1．InstituteImmunology，Zh巧iangUniversity，Hangzhou 2．TheFirstAffiliated of 310003， Hospital，CollegeMedicion，ZhejiangUniversity，Hangzhou China) constructa vector the of [-Abstract]Objective：To eukaryoticexpressionencodinggene ofmouse itin celllineandtodetermineits extracellular B7-H4，toexpress region yeast biological extracellularofthemouse was withXhoI B7一H4 activity．Methods：Theregion gene amplified andEcoRI PCRfromamouseB7一H4chimeric withXhoI