阿拉伯芥atToc159转运蛋白基因的细胞专一性表现与领先内插子对.PDFVIP

生物學報（2013 ）48 ：33-44 DOI ：10.6248/BF.2013.48.05 阿拉伯芥atToc159 轉運蛋白基因的細胞專一性表現與領先內插 子對基因表現的影響 劉玉山 孫智雯* 國立臺灣師範大學生命科學系 （收稿日期：2013.4.12 ，接受日期：2013.5.9 ） 摘 要 根據蛋白質胺基酸序列的相似度與運輸蛋白質種類的不同，可將阿拉伯芥四種 Toc159 的同源蛋白質，分成 atToc159/atToc90和 atToc132/atToc120 兩大群。其中atToc159/atToc90 被認為與辨識和運輸光合作用蛋白質有關，atToc132/atToc120則可能負責辨識和運輸非光合 作用蛋白。在阿拉伯芥生長發育的過程中，這些轉運蛋白的基因必須被適當的調控，否則 色質體的發育與生理將因缺乏必需的蛋白質的輸入而被抑制。為了解 atToc159 基因家族的 表現機制，轉殖分別攜帶不同長度的基因上游調控序列的重組質體進入野生型阿拉伯芥， 以獲得穩定轉殖的植株。分析這些轉殖植株中營養器官的GUS酵素活性及 mRNA 表現量， 發現 atToc159 、atToc132/90和 atToc120 基因在七天齡的幼苗中分別有最高，次之及最低的 表現量。此外，位於atToc120和 atToc90的 5′ UTR內的領先內插子序列會明顯增加其基因 表現量。進一步探討光對內插子在基因表現上的影響，比較生長在光照和黑暗條件下的 120PUI和 120P轉殖株的 GUS 表現量，我們發現黑暗會提高內插子效應。除了進行不同組 織的基因表現之比較分析外，我們也進行了這些轉殖株中基因的細胞專一性表現的研究。 令人驚訝的，在與atToc159和 atToc132的比較下， atToc90和 atToc120 在子葉保衛細胞中 基因的表現量明顯地要比葉肉細胞多，這顯示atToc90和 atToc120在保衛細胞運輸蛋白質進 入葉綠體上可能扮演一定的角色。這些研究結果支持葉綠體轉運蛋白 atToc159 基因家族之 基因的表現量在不同的組織和發育階段的差異，可能是受到不同的發育和環境的因子刺激 所調節。 關鍵詞：阿拉伯芥、atToc159 基因表現、領先內插子、GUS報導基因、保衛細胞 緒 言 (lipid synthesis)色素合成、 (pigment synthesis) 、 色質體基因表現 (殘存在色質體的基因) 、膜系 色質體 (plastids)是植物細胞內最重要的 組裝(membrane assembly)及光訊號接收 (light 胞器之一，主要包括白色體(leucoplasts) 、雜 perception)皆會受到嚴重的抑制 (Rochaix et al., 色體 (chromoplasts)和葉綠體(chloroplasts) 等三 2004) 。 種。這些色質體均是由原色質體 (proplastids) 色質體內大多數的細胞核解碼蛋白 衍生而來，只要給予適當的訊號，他們可以進 (nucleus-encoded proteins)要運輸回到色質體 行彼此之間的轉換。根據演化的內共生理論 中，需要在細胞核內的基因轉錄及在細胞質內 (endosymbiont hypothesis) ，色質體存在於植物 轉譯並修飾後，再傳送回色質體內。大多數的 細胞中起源於遠古時期，將藍綠菌 色質體內的蛋白質，多含有一段特別的胜肽構 (cyanobacteria) 經由胞吞作用(endocytosis)移 造位於其胺基端延伸(N-terminal exten