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柑橘抗寒研究进展和展望 　　摘要 柑橘是一种经济价值极高但又常受冻害影响的亚热带果树，该文从柑橘抗寒生理生化和柑橘抗寒分子机理研究两方面总结了国内外在柑橘抗寒研究中取得的成果，并由此提出了柑橘抗寒在生物技术方面的研究展望。 　　关键词 柑橘抗寒；生理生化；分子机理；研究进展 　　中图分类号 S666 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）10-0105-03 　　1 柑橘抗寒生理生化研究 　　植物抗寒性生理生化研究主要包括植物激素、生物膜组成成分、脂膜过氧化、各种抗氧化酶系统、信号转导物质等外源物质与其的关系，许多研究表明：外源Ca2+处理可提高植物对低温胁迫、盐胁迫和渗透胁迫等抗逆性[3-5]。张建霞等[6]研究发现，用一定浓度的Ca2+处理柑橘叶片能够增加柑橘可溶性糖和可溶性蛋白质的含量，提高SOD和POD的活性，同时减少膜质过氧化物丙二醛（MDA）的积累，从而提高柑橘的抗寒性，说明钙信号系统参与调节柑橘抗寒中膜脂过氧化和保护性酶等生理生化反应；李新国等[7]发现，利用一定浓度的Ca2+能明显增加柑橘愈伤组织可溶性蛋白质、可溶性糖和脯氨酸含量，采用Ca2+螯合剂EGTA或钙调素拮抗剂TFP对柑橘愈伤组织低温处理一段时间后，柑橘愈伤组织中可溶性蛋白质、可溶性糖和脯氨酸含量降低。以上结果说明，Ca2+信号系统参与了调节柑橘抗寒过程中渗透物质的合成以及抗氧化过程。 　　钙作为细胞内重要的第二信使，在细胞信号转导过程中发挥了重大作用。钙信号的形成主要是基于细胞溶质中Ca2+浓度的时空变化。因此，对细胞内Ca2+动态变化的测定，是研究细胞信号转导的途径和众多生理变化机理的重要手段之一。李琼[8]利用焦锑酸钙沉淀法对枳壳和?崭讨械母评胱咏?行了组织定位研究，发现抗寒性较弱的?崭桃镀?中Ca2+在常温条件下主要是分布在细胞壁外围，叶绿体和胞基质中分布的很少，4 ℃下处理2 h后，叶绿体、胞基质、液泡中Ca2+浓度升高，细胞外即细胞壁和胞间隙的Ca2+浓度降低，随着低温处理时间延长，叶绿体、液泡、胞基质、胞间隙中都分布有钙沉淀。但是，细胞外即细胞壁和胞间隙的Ca2+浓度较叶绿体、液泡、胞基质中低；而在较抗寒的品种枳壳中发现叶片的细胞壁外围、液泡、细胞间隙中存在钙沉淀，并且其沉淀数目较多，沉淀颗粒均大于?崭蹋?这可能是因为枳壳的抗寒性强于?崭蹋?而更易感受到信号的缘故，随着低温处理时间的延长，其叶绿体、胞基质、液泡都出现大量的钙沉淀，但最终还是以胞外的钙沉淀为主，说明抗寒性强的品种枳壳其松弛结合钙的运转浓度要大于抗寒性弱的品种?崭獭＠?用激光扫描共聚焦荧光显微镜观察了来檬原生质体的[Ca2+]cyt荧光染色结果，发现温度的骤降引起了来檬原生质体[Ca2+]cyt的增加，而温度缓慢的降低没有引起Ca2+的变化，说明在[Ca2+]cyt的瞬间变化更重要的是降温速率而不是在于绝对的温度值。在反复的低温刺激下，会弱化Ca2+浓度的敏感变化。正是这种信号的弱化，使植物对低温产生了适应。 　　大量试验结果表明，植物在遭受逆境胁迫后，无论是何种逆境条件，体内都能够迅速积累大量的脱落酸和乙烯，在低温、水分胁迫的逆境条件下，植物激素是植物对逆境控制的重要因素之一[9-13]，朱丽丽[14]以?崭汤胩迕缥?试材，利用含有ABA的营养液预处理后于4 ℃下进行低温处理后发现用ABA预处理大大提高了?崭逃酌绲目估湫裕?出现了一系列有利于抗冷的生理变化：叶片电解质渗透率减少，细胞透性降低；根系活力增加，维持较高的蛋白质含量，过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）的活性增加或将抗氧化酶活性维持在较高水平，一定程度上提高?崭逃酌绲牡臀履褪苄裕煌?时利用SDS电泳技术研究低温胁迫下ABA诱导特异蛋白表达情况，发现出现了ABA特效诱导的多肽，说明ABA作为接受外界低温信号物质诱导产生大量蛋白质，帮助其抵御外界低温环境的伤害。 　　近年来，学者们围绕多胺与植物之间的抗逆性之间的关系做了大量工作，主要是关于对多胺在提高植物的抗逆性中发生的作用以及内源变化方面展开[15-18]，王 静等[19]将枳壳幼苗在4 ℃条件下处理了10 d，发现其体内总腐胺、亚精胺、精胺含量分别为常温（25 ℃）对照的1.32、2.29、0.44倍，为了确定是哪种多胺起作用，在4 ℃胁迫下，加入了单一不同浓度的腐胺或腐胺和D-Arg组合后，极显著提高了内源亚精胺、精胺和腐胺的量，其中以对腐胺的差别倍数最大，随后又测定了枳壳（抗寒）和四季橘（不抗寒）内源多胺的变化，发现枳壳总多胺的含量增加，以腐胺增加的最明显，同时均高于相应时间点的对照；而四季橘而不抗材料（四季橘）总多胺含量下降，腐胺变化不大，亚精胺、精胺呈不规则变化，但仍都低于相应时间点的对照；并且在常温下，枳壳的