王镜岩生化第三版考研 第9章 酶促反应动力学.ppt

截距 * V下降发生抑制 Km不变 亲和力不受影响 Vmax减小 部分酶始终失活 * Km不变，Vmax变小 * 3. 反竞争性抑制作用 * * * Km、Vmax都变小 * * 上图反映出温度如何影响酶活力？ 产物累积量 相对酶活％ 最适温度 最适温度 动物酶 35~40℃ 植物酶 40~50℃ 微生物 大部分 40~50℃ 个别高温菌 90℃以上 四、温度对酶反应的影响 * 温度越高，活化分子越多，反应速度快； 酶变性时间越短，反应速度下降也迅速。 * 五、pH 对酶反应的影响 最适pH时的酶活力最大 最适pH因酶而异，多数酶在7.0左右 是酶的特性之一 * 六、激活剂对酶反应的影响 * ①无机离子 阳离子 K+、Ca2+、Na+、Mg2+、Zn2+等 阴离子 Cl -、Br -等 * ②中等大小的有机分子 ③某些激酶 * * * ④有机汞、有机砷化合物 ——与酶分子中-SH作用； 可通过加入过量巯基化合物解除。 * ⑤氰化物、硫化物和CO ——与酶中金属离子形成稳定的络合物 如氰化物与含铁卟啉细胞色素氧化酶结合 ⑥青霉素（penicillin） 与细菌糖肽转肽酶Ser-OH活性， 影响细胞壁合成。 * （2） 专一性不可逆抑制剂 ①Ks型 具有底物类似的结构——（设计） 带有一活泼基团：与必需基团反应（抑制） ∵利用对酶亲合性进行修饰 ∴亲合标记试剂（affinity labeling reagent） * ②Kcat型 具有底物类似的结构 本身是酶的底物 还有一潜伏的反应基团 “自杀性底物” * 抑制作用可通过透析等方法除去。 原因：非共价键结合 可逆抑制 竞争性抑制(competitive inhibition) 非竞争性抑制(non-competitive I.） 反竞争性抑制(uncompetitive I.) 3、可逆抑制作用： * （1）竞争性（Competitive)抑制 * I： 抑制剂（ inhibitor） * * 【举例】 丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶 琥珀酸 琥珀酸脱氢酶 FAD FADH2 延胡索酸 琥珀酸 * 竞争性抑制 * 磺胺类药物的抑菌机制： 与对氨基苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶 二氢蝶呤啶 ＋ 对氨基苯甲酸 ＋ 谷氨酸 二氢叶酸 合成酶 二氢叶酸 * 利用竞争性抑制是药物设计主要思路 磺胺类药抗菌机理： （与对氨基苯甲酸是结构类似物） 竞争性抑制细菌叶酸形成，抑制细菌繁殖 人通过食物直接补充叶酸，对人无毒害。 * 生物碱麻醉—竞争性替代 生物碱—吗啡、海洛因、可卡因、尼古丁 吗啡 海洛因 * 麻醉机理 源自—37C医学网 痛觉神经信号 阿片—鸦片类物质 生物碱竞争性替代脑肽—麻醉致幻 脑肽(E)控制痛觉信号的释放 * 抑制物 （2）非竞性（Non-competitive)抑制 无法形成产物 * Noncompetitive inhibition * * （3）反竞争性（Uncompetitive ）抑制 * * * 1：反应体系不加I 2： 体系中加入 一定量不可逆抑制剂 3：体系中加入 一定量可逆抑制剂 v 1 2 3 [E] (三)可逆和不可逆抑制作用的鉴别 * [E] v 不可逆抑制剂 的作用 [E] v 可逆抑制剂 的作用 [I ]→ [I ] * (四）可逆抑制作用动力学 * 1.竞争性抑制 * 消去[ES] * * * 斜率 斜率 * 竞争性：I与S与酶活性中心结合机会均等 V下降发生抑制 Km增大亲和力 Vmax不变 [S] 增大， I结合机率减小 * Km 变大，Vmax不变 * 2.非竞争性抑制 * * （3） kcat/km的意义： V= Vmax[S] Km + [S] ∵Vmax=kcat[Et] ∴ V= kcat[Et][S] Km + [S] 当[S] Km时，[E]＝[Et] * 是E和S反应形成产物的表观二级速率常数。 其大小可用于比较酶的催化效率。 kcat/km＝ kcat/km的上限为k1,即生成ES的速率，即酶的催化效率不超过E和S形成ES的结合速率 kcat/km的大小可以比较不同酶或同一种酶催化不同底物的催化效率。 * （1）Lineweaver-B