线粒体电压依赖性阴离子通道在心肌细胞缺氧／复氧损伤中的作用术.PDFVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(5)：1115—1120 [文章编号] 1000—4718(2011)05—1115—06 线粒体 电压依赖性阴离子通道在 心肌细胞缺氧／复氧损伤 中的作用术 廖章萍 ， 章志玲 ， 李 娟 ， 邹逢琳 ， 尹淑华 ，何 明 (南昌大学药学院药理学与分子治疗学教研室，江西省人民医院心内科，江西 南昌330006) [摘 要] 目的：探讨线粒体电压依赖性阴离子通道 (VDAC)在 H9c2心肌细胞缺氧／复氧(A／R)损伤中的 作用及机制。方法：以pSUPER质粒为载体，构建 shRNAVDAC1质粒。H9c2细胞随机分为5组 ：control组、缺氧／ 复氧 (A／R)组、缺氧预处理 (APC)组、pSUPER—VDAC1一A／R组和 pSUPER—A／R组。Westernblotting法测定 VDACI的蛋白表达 ，MTF法检测细胞存活率 ，生化 自动分析仪测定乳酸脱氢酶 (LDH)和肌酸磷酸激酶 (CPK)活 性，流式细胞仪法检测线粒体膜电位。结果：A／R处理后，VDAC1表达上调，细胞存活率下降，LDH和CPK活性增 高，线粒体膜电位崩溃；而APC则能抑制 VDAC1的上调，并对抗 A／R损伤；与APC相似，通过 RNA干扰下调 VDAC1后，亦能有效保护心肌细胞，维持线粒体膜电位，提高细胞存活率。结论：下调VDAC1可有效对抗 A／R损 伤引起的线粒体通透性转换孔道的开放 ，维持线粒体膜电位 ，保护心肌细胞。 [关键词] 电压依赖性阴离子通道；线粒体通透性转换孔道；缺氧／复氧；心肌细胞 [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．06．013 Roleofvoltage—-dependentanionchannelincardiomyocytessubjectedto anoxia／reoxygenation LIAO Zhang—ping ，ZHANG Zhi—ling ，LIJuan ，ZOU Feng—lin ，YIN Shu—hua ， HEMing (DepartmentofPharmacology MolecularTherapeutics，NanchangUniversitySchoolofPharmaceuticalScience， CardiovascularDivisionofJiangxiPrvoincialPeoplesHospital，Nanchang330006，China．E—mail：jxhm56@hotmail． com) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheroleofvoltage—dependentanionchannel(VDAC)inH9c2eardiomyo— cytessubjectedtoanoxia／reoxygenation(A／R)．METHODS：TheshRNAstargetingVDAC1mRNAwereinsertedinto pSUPER plasmid．H9c2cellswererandomlydividedinto5groupsas~llows：controlrgoup，A／R rgoup，anoxiaprecondi- tioning(APC)rgoup，pSUPER—VDAC1一A／RgroupandpSUPER—A／Rrgoup．TheexpressionofVDAC1wasdetected byWestern blotting．Cellularinjurywasevaluatedbymeasuringthecellviabilitynadthereleaseoflactatedehydrogenase (LDH)andcreatinephosphokinase(CPK)．Themitochondriamembranepotentialwasdeterminedbyflowcytometry．RE- SULTS：VDAC1expressionwasup—regulatedinA／R rg