核苷二磷酸激酶A的定点突变及C4S突变体的制备和活性研究.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（７）：１２１７ ? 核苷二磷酸激酶Ａ的定点突变及 Ｃ４Ｓ 突变体的制备和活性研究 １ １ １ １ ２ １ １ 陈蕴如 　郭朝万 　黄增委 　钱垂文 　张晓伟 　王一飞 　熊　盛 （１暨南大学生物医药研究开发基地 基因工程药物国家工程中心　广州　５１０６３２　２南昌大学转化医学研究院　南昌　３３００３１） 摘要　目的：对核苷二磷酸激酶Ａ（ＮＤＰＫＡ）二硫键异构的关键残基Ｃ４进行定点突变，构建、表达 并纯化Ｃ４Ｓ突变体，测定其磷酸转移酶活性和ＤＮａｓｅ活性，研究二硫键异构对ＮＤＰＫＡ活性的影响。 方法：以ｐＢＶ２２０ｎｍ２３Ｈ１质粒作为模板，通过设计合适的引物对ＮＤＰＫＡ进行定点突变，将第４位 半胱氨酸突变为丝氨酸，构建ＮＤＰＫＡＣ４Ｓ突变体；在大肠杆菌ＢＬ２１中表达，ＤＥＡＥｓｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔ Ｆ