玻璃酸酶粗品中猪牛羊源性成分的PCR检测.PDFVIP

796 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2018, 49 6 · · 中国医药工业杂志 ( ) 玻璃酸酶粗品中猪、牛、羊源性成分的 PCR 检测 1 2,3 2 * 周建华 ，李松播 ，王自强 1. 200240 2. 201203 3. 201203 ( 上海上药第一生化药业有限公司，上海 ； 上海市食品药品检验所，上海 ； 中国医药工业研究总院，上海 ) 摘要 ：基于限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术及 TaqMan 探针实时荧光 PCR 技术，建立针对玻璃酸 酶粗品的猪、牛及羊源性成分鉴定方法。用 DNA 提取试剂盒提取玻璃酸酶粗品中的 DNA ，以DNA 提取液为模板进行 PCR-RFLP TaqMan PCR 2 PCR 及 探针实时荧光 ，检测样品中是否含有猪、牛、羊源性成分。 种 方法均具有良好的特异性， 且皆可检测到 0.01 ng/µl 的猪、羊源性DNA ，和 0.1 ng/µl 的牛源性DNA ，实时荧光PCR 方法更可检测到 0.001 ng/µl 的 猪源性 DNA 。PCR-RFLP 方法和 TaqMan 探针实时荧光 PCR 方法可用于检测生化药品原材料的种属来源。 关键词 ：玻璃酸酶；种属鉴定；限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)；实时荧光 PCR Q78 Q556 A 1001-8255 2018 06-0796-07 中图分类号： ； 文献标志码： 文章编号： ( ) DOI ：10.16522/ki.cjph.2018.06.014 玻璃酸酶是从哺乳动物睾丸中提取的一种能 套鉴别生化药品原材料种属的方法对控制生化药品 水解玻璃酸类黏多糖的酶，是一种重要的药物扩散 的质量具有重要意义。 剂，属于生化药品的一种。中国药典 2015 年版(ChP 现有的种属鉴别方法主要包括形态学方法、理 2015 ) 要求本品应从检疫合格的哺乳动物睾丸中提 化方法、免疫学方法和分子生物学方法等 [4—6 ] 。 取，所用动物的种属应明确。另外，国家食品药品 DNA 作为遗传物质具有结构相对稳定、能够自我 监督管理总局在 2017 年公布并实行的 GMP 《生化 复制、能够贮存遗传信息的优良特性，并且 DNA 药品附录》中规定 [1] ：生化药品的原材料来源应相 存在于动物体所有组织中，将其作为目标检测物可 对稳定，应明确动物的种属及器官组织，必要时对 以从物种根本性的遗传物质来判定种源，灵敏度 原材料的动物种属进行鉴别 ( 如 PCR 法等 )。这是 更高、特异性更好。本研究采用限制性片段长度多 因为不同动物、不同组织来源的药品，其药效可能 态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术及 TaqMan 探 存在一定差异，所产生的不良反应也可能不同。例 针实时荧光 PCR 方法，对 3 批标注为羊源性的玻 如，有研究证实，牛源性肝素诱导血小板减少症的