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l TB培养基与LB培养基培养大肠杆菌后提取质粒对比 摘要： LB培养基中的酵母粉可以为微生物提供丰富的维生素、微量元素和生长因子。nacl的作用是提供微生物生长的渗透压和提供无机盐离子。TB培养基是一种通用培养基，用于各种微生物的培养，其中甘油主要是为大肠杆菌的生长提供碳源。两种培养基各有优缺。本实验以碱裂解法为例，探究TB培养基与LB培养基的培养大肠杆菌提取质粒的区别。在试验过程中两种培养基同步对比实验条件下，TB培养基提取效果没有LB培养基的效果理想。 关键词：大肠杆菌；碱裂解法；TB培养基 ；LB培养基；质粒 TB medium LB medium e. coli extraction train after plasmid contrast Abstract：LB medium yeast powder for microbes can provide rich vitamin, trace elements and growth factors. Nacl role is to provide microbial growth of osmotic pressure and provide inorganic salt ions. TB culture medium is a kind of common culture medium, used for the training of all kinds of microbes, which is mainly for e. coli glycerin provide carbon source of growth. Two kinds of culture media and each has advantages and disadvantages. This experiment with alkali cracking method for example, explore TB medium medium of e. coli LB training extraction plasmid difference. In the course of the experiments, two kinds of culture media synchronization contrast experiment condition, the TB medium effect no LB medium of extraction results. Keywords：escherichia coli alkali cracking method TB medium LB medium plasmid 碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性[1]。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc/KAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质－SDS复合物等一起沉淀下来而被除去[2]。 两种培养基1L的试剂用量对比 成分 LB培养基 TB培养基 蛋白胨 10g 12g 酵母提取物 5g 24g 甘油 无 4ml NaCl 10g 无 KH2PO4 无 2.31g K2HPO4 无 12.54g 注：TB培养基中各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml[3]。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌），使其最终定容为1L。 LB培养基中如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 1. 实验部分 1.1实验器材 恒温摇床、试管、培养基、培养皿、无菌牙签（灭过菌的牙签）、板式超低温高速离心机、恒温培养箱、紫外成像仪、300 μl排枪、10 μl排枪、1ml单枪、不同规格的枪头、涡旋振荡器、冰箱、浅孔板、过滤板、封板膜、胶垫 1.2实验材料 含有质粒pUC18载体的大肠杆菌菌液、蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、甘油、抗生素、灭菌双蒸水、无水葡萄糖、RNase A、氢氧化钠、SDS、Tirs base、EDTA、硼酸、乙酸甲、冰醋酸、浓