第四章 柠檬酸谷氨酸发酵机制.pptVIP

一、概 述 在食品工业上的应用。甘氨酸、丙氨酸具有甜味，天冬氨酸、谷氨酸具有酸味，谷氨酸钠、天冬氨酸钠具有鲜味，可用作食品添加剂。蛋氨酸、赖氨酸、谷氨酸钠、甘氨酸、丙氨酸和苏氨酸目前作为饲料添加剂。 在医药工业上的应用。氨基酸的混合液可供病人注射用，氨基酸的混合粉剂可作宇航员、飞行员的补品。精氨酸药物用于治疗由氨中毒造成的肝昏迷；丝氨酸药物用作疲劳回复剂；蛋氨酸、胱氨酸用于治疗脂肪肝；L－谷氨酸与L－谷氨酰胺用于治疗脑出血后的记忆力障碍等。 在化妆品生产中的应用。氨基酸及其衍生物与皮肤的成分相似，具有调节皮肤pH和保护皮肤的功能。胱氨酸用于护发素中，丝氨酸用于面霜中。谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸与脂肪酸形成的表面活性剂，具有清洗、抗菌等功能，用于护肤品、洗发剂。 在农业上的应用。一些氨基酸在体外并无杀菌功能，但能干扰植物与病原菌之间的生化关系，使植物的代谢及抗病能力发生变化，从而达到抑菌的目的。苯丙氨酸和丙氨酸可用于治疗苹果疮痂病。用甘氨酸制成了除草剂，易被微生物分解，不会造成环境污染。 二、氨基酸的发酵生产 氨基酸本身的合成在不同生物体中，有较大的差异，然而许多氨基酸的合成途径在不同生物体中也有共同之处。 按照起始物可将氨基酸的合成分成几个家族： ㈠谷氨酸族（α-酮戊二酸族） 包括：谷氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、赖氨酸和脯氨酸； ㈡丙酮酸族 包括：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸； ㈢天冬氨酸族（草酰乙酸族） 包括：天冬氨酸、天冬酰胺、苏氨酸和异亮氨酸； ㈣磷酸甘油酸族 包括：甘氨酸、丝氨酸和半胱氨酸； ㈤芳香族 包括：苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸； ㈥组氨酸 合成为单独的一条途径。 部分氨基酸及其生产所用菌株 谷氨酸产生菌因环境条件变化而引起的发酵转换 早期生产谷氨酸的方法有两种，一是提取法：甜菜厂付产物糖蜜中含有焦谷氨酸，用强碱处理可得到谷氨酸；二是蛋白质水解法：将面筋加酸水解，再分离提纯。 1957年发酵法生产谷氨酸在日本协和发酵公司投产。 通过代谢调控发酵谷氨酸生产菌能够在体外积累菌体最大生长需要量300多倍的谷氨酸 氨基酸发酵是典型的代谢控制发酵 氨基酸发酵是典型的代谢控制发酵。由发酵所生成的产物——氨基酸，都是微生物的中间代谢产物，它的积累的关键是取决于是否能打破微生物的正常代谢调节。 控制旁路代谢 降低反馈作用物的浓度：控制反馈作用物浓度是克服反馈抑制和阻遏，使氨基酸的生物合成反应能顺利进行的一种手段 消除终产物的反馈抑制与阻遏：通过使用抗氨基酸结构类似物突变株的方法来进行 控制细胞渗透性 控制发酵环境 促进ATP的积累，以利于氨基酸的生物合成 D-苏氨酸 L-苏氨酸 α-酮基丁酸 L-异亮氨酸 L-苏氨酸 脱氢酶 反馈抑制 D-苏氨酸 脱氢酶 谷氨酸 N-乙酰谷氨酸 N-乙酰-γ-谷氨酰磷酸 N-乙酰谷氨酸-γ-半醛 N-乙酰鸟氨酸 鸟氨酸 瓜氨酸 精胺琥珀酸 精氨酸 负反馈控制 N-乙酰谷氨酸激酶 Arg- 天冬氨酸 天冬氨酰胺磷酸 天冬氨酸半缩醛 高丝氨酸 苏氨酸 赖氨酸 天冬氨酸激酶 协同反 馈抑制 谷氨酸 溶解氧 发 酵 产 物 转 换 环境因子 乳酸和琥珀酸 α－酮戊二酸 （通气不足） （适中） （通风过量，转速过快） NH4+ α－酮戊二酸 谷氨酸 谷氨酰胺 （适量） （缺乏） （过量） pH值 谷氨酰胺，N-乙酰谷酰胺 谷氨酸 （pH值5～5.8，NH4+过多） （中性或微碱性） 磷酸 缬 氨 酸 谷氨酸 （高浓度磷酸盐） （磷酸盐适中） 生物素 乳酸或琥珀酸 谷氨酸 （过量） （限量） 三、谷氨酸发酵 （一）合成谷氨酸的生化途径 葡萄糖 丙酮酸 草酰乙酸 柠檬酸 琥珀酸 透过细胞膜 异柠檬酸 α- 酮戊二酸 谷氨酸 谷氨酸 谷氨酸的生物合成途径大致是：葡萄糖经糖酵解（EMP途径）和己糖磷酸支路（HMP途径）生成丙酮酸，再氧化成乙酰辅酶A（乙酰COA），然后进入三羧酸循环，生成α－酮戊二酸。α－酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶的催化及有NH4+存在的条件下，生成谷氨酸。 Glucose的酵解，EMP Glucose的有氧氧化，HMP 丙酮酸的有氧氧化，TCA循环 乙醛酸循环途径，DCA循环 CO2固定反应 α-KGA的还原氨基化 （二）谷氨酸生产菌的生化特征—内在因素 1 生物素缺陷型 谷氨酸产生菌大多数为生物素缺陷型,谷氨酸发酵时, 控制生物素亚适量(贫乏量) ,引起菌种代谢失调, 使谷氨酸得到大量积累。 2 具有CO2 固定反应的酶系 菌种能利用CO2 产生大量草酰乙酸, 有利于谷氨酸的大量积累。 3.α-KGA脱氢酶酶活性微弱或丧失 这是菌体生成并积累α-KGA的关键，α-K