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(EMS, 甲基磺酸乙脂) (MMS, 甲磺酸甲酯 ), (ENU, 乙烷基亚硝基脲) (TEM,三乙基三聚氰胺) ( ICR-170, 吖啶诱变剂) (DEB, 二环氧丁烷) (Formaldehyde, 甲醛) 化学诱变剂 * EMS 在果蝇基因组中平均每400kb可诱导一个点突变，这一点突变80%是G/C到A/T的转换。 * X射线 诱导突变 诱导有丝分裂交换 引起体细胞辐射损伤 * 转座子：可移动的遗传因子 1983年诺贝尔生理学及医学奖 Barbara McClintock 1902-1992 Corn (maize) varieties * 转座子诱导的突变 * 反向遗传学 转座子剪切 转基因 RNAi 基因打靶 正向遗传学 具有随机性，常常不能得到实验需要的突变体。 * 转座子剪切 * * 转化 P-element介导的转基因 带有P-element及标记基因的质粒+del2-3质粒（提供转座子酶） * 显微注射 受精卵的准备 * Syncitial blastoderm Germ cells * * phiC31介导的定点转基因 fC31 Co-injection of attB-construct DNA with fC31 mRNA into attP embryos ~ 10-50% integration rate transgenic insertion attP attB attR attL * RNAi * 基因打靶 * 目标基因的断裂可增加同源重组发生的概率 果蝇基因打靶杂交流程 * FokI nuclease domain (Fn) FokI nuclease domain (Fn) ZFN * TALEN * CRISPR/Cas9 * 基因打靶与定点整合的结合 Genomic Engineering * SIRT (site-specific integrase-mediated repeated targeting) * IMAGO (integrase-mediated approach for gene knock-out) * 果蝇中常用的基因调控元件 Flp/FRT Cre/loxP UAS/Gal4(Gal80) * Flp/FRT * Flp white FRT FRT X * Flp/FRT介导的突变体克隆 * Cre/loxP * UAS/Gal4(Gal80) * 主要优点： 个体小，饲养成本低； 生命周期短，繁殖能力强； 遗传操作手段成熟，突变体资源丰富； 有比较复杂的行为能力 基因组测序已经完成（2000年）。 染色体小：3对常染色体，1对性染色体 基因组大小约为120Mb 约13,600 基因 75%的人类已知致病基因中在果蝇中有同源序列 * 应用： 癌症 神经退行性疾病 免疫 衰老 行为学 * 黑腹果蝇生活史 * * 雌 雄 果蝇的雌雄分别 sex combs * 处女蝇（virgin female） * X/Y, 2A 雌蝇 X/X, 2A 雄蝇 X/0, 2A 不育的雄蝇 X/X/Y, 2A 可育雌蝇 果蝇的性别决定 X染色体与常染色体的比例 =1，雌蝇 =0.5 雄蝇 Y染色体不是果蝇雌雄的决定因素，它只与育性有关。 * 黑腹果蝇染色体 多线染色体（polytene chromosome）：果蝇唾液腺中一种缆状的巨大染色体，由核内有丝分裂产生的多股染色单体平行排列而成。 * 104 * 染色体重排 Inversion （倒位） Translocation（易位） Compound chromosome （复合染色体） a b b a * Duplications （重复） Deficiencies （缺失） * 平衡系染色体（balancer） 1、多个位点的大段倒位，使之不能和正常染色体发生重组。 2、带有隐形致死突变，不能纯合。 3、带有显性表型标记，易于辨别。 * 果蝇的系统命名法 f; cn bw; TM2/tra C(1)RM,y2/Y; In(2LR)O, Cy/Sco; ciD/eyD * 果蝇基因的命名 sevenless 受体 bride of sevenless（boss） 配体 son of sevenless（sos） 信号分子 * * 染色体交换 雄蝇中不会发生！ * 黑腹果蝇不同性状 * * / 果蝇资源 * * * 果蝇突变体库 / * * 果蝇的基本特点 果蝇相关的研究成果 果蝇的遗传操作工具 果蝇在人类疾病机制研究中的应用 * * 被称为“遗传学之父”。 用果蝇证实了孟德尔定律，发