转基因抗虫蛋白Cry1Ac与表面活性剂作用的芘探针光谱分析.PDF

Ｖｏｌ．３９ 高等 学校 化 学 学报 Ｎｏ．５ ２０１８年５月 　 　 　 　 　 　 ＣＨＥＭＩＣＡＬＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩＮＥＳＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＩＥＳ　 　 　 　 　 　 ８８３～８８８ ｄｏｉ：１０．７５０３／ ｃｊｃ 　 　 转基因抗虫蛋白Ｃｒｙ１Ａｃ 与表面活性剂 作用的芘探针光谱分析 １ １ ２ １ １ １ 梁运姗 ，黄致君 ，柳亦松 ，钱子妍 ，颜碧玥 ，王　 智 （１． 湖南农业大学生物科学技术学院，洞庭湖区农村生态系统健康湖南省重点实验室，长沙４１０１２８； ２． 湖南农业大学动物医学院，兽用中药资源与中兽药创制国家地方联合工程研究中心，长沙４１０１２８） 摘要　 以芘作为外源荧光探针，采用牛血清蛋白作为参照，考察了转基因抗虫蛋白Ｃｒｙ１Ａｃ与４种表面活性 剂相互作用的荧光光谱特征． 结果表明，鼠李糖脂和Ｔｗｅｅｎ８０体系的芘荧光行为有相似的变化规律，可与蛋 白质发生稳定的缔合过程． Ｃｒｙ１Ａｃ蛋白的亲水性和分子极性较强，在表面活性剂浓度低时，可导致芘的Ｉ ／ Ｉ １ ３ 值较高． 在阴离子、非离子表面活性剂胶团形成后，２种蛋白质的存在均不改变芘与表面活性剂的结合位点． 十六烷基三甲基溴化铵对芘的荧光有一定猝灭作用，且在Ｃｒｙ１Ａｃ蛋白介入下不能形成稳定的胶束． 关键词　 芘 ；荧光；表面活性剂；Ｃｒｙ１Ａｃ；牛血清蛋白；微环境 中图分类号　 Ｏ６５７．３　 　 　 　 文献标志码　 Ａ　 　 　 　 近年来，转基因作物在农业与商业上快速推广，有效提高了农作物的经济效益，解决了全球粮食 短缺与农药化学污染问题． 据调查，至２０１５年，全球转基因作物面积达２０亿公顷，而其中抗虫转基因 ［１］ 作物（主要为Ｂｔ抗虫作物）约占１５％，成为发展最快和应用最广泛的转基因作物 ． Ｂｔ蛋白在土壤与 水体中的残留、残留蛋白对非靶标生物的影响以及对土壤系统生物多样性和人类健康的影响等成为备 ［２～４］ 受关注的生态问题 ． 表面活性剂由于其本身的结构与性能特点，可以将有机污染物从环境固相介 ［５］ 质中解吸下来，再通过淋洗法将其洗脱，从而可能改变有机污染物在环境中的界面行为 ． 表面活性 剂修复法效率高、时间短，已成为环境修复特别是土壤修复的一种重要方法［６～１０］． 但迄今，有关Ｂｔ抗 ［７］ 虫蛋白在土壤⁃水生态系统中的环境行为的研究报道尚不多见． Ｈｅｌａｓｓａ等 在Ｃｒｙ１Ａａ蛋白从矿物表面 解吸实验中发现，在两性离子表面活性剂（ＣＨＡＰＳ）和非离子表面活性剂（Ｔｒｉｔｏｎ⁃Ｘ１００ 和Ｔｗｅｅｎ ２０）介 入下，８０％～１００％的吸附态Ｂｔ蛋白可以从矿物表面发生解吸． 但是，并非所有类型的表面活性剂均能 导致Ｂｔ蛋白在固相表面的吸附行为发生变化，如阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）和Ｓａｒｋｏｓｙｌ． 这是因为不同性质的表面活性剂与不同类型的蛋白质相互作用往往具有较大差异． 然而，对于表面活 性剂与Ｂｔ蛋白可能的缔合作用及微环境分析尚未有深入报道． 荧光探针法可以较灵敏和准确地探测表面活性剂的胶束化、表面活性剂与大分子化合物相互作用 等过程中的微环境变化，在医学、工业、生物化学和环境生态系统分析等领域中被广泛应用［１１