不同栝楼Trichosanthes kirilowii品系种子超微结构及抗旱性对比的研究.docVIP

不同栝楼Trichosanthes kirilowii品系种子超微结构及抗旱性对比的研究 　　[摘要]除具传统药效外，栝楼还有较好的保健和食用价值，开发前景广阔，各地大量引种栽培，其种子种苗的抗旱性是品种选育的重要方向。该文以生产上2个重要栝楼品系（KXY-001和KXY-005）为研究对象，采用扫描电镜观察比较2个品系种子表面超微结构，采用聚乙二醇（PEG-6000）模拟不同程度的干旱胁迫，比较2个品系栝楼种子萌发率、丙二醛含量、叶绿素含量以及抗氧化物酶的活性。结果显示，与品系KXY-005相比，品系KXY-001种子表面色淡，以黄褐色或浅褐色为主；种皮网纹排列致密；种脐较大，中央下陷且平整。不同程度干旱胁迫下，品系KXY-001种子萌发率均高于品系KXY-005。随着干旱程度的加剧，2个品系中的MDA含量呈明显上升趋势；叶绿素含量则急剧下降；品系KXY-001体内的SOD活性明显高于品系KXY-005；但二者的POD，CAT活性总体表现出先升高后降低的趋势。总之，种子表面网纹以及种脐性状可作为鉴别2个品系的鉴别点；2个品系是通过启动SOD和POD来达到抗旱目的，而且品系KXY-001抗旱性优于品系KXY-005。 　　[关键词]栝楼；品系；超微结构；抗旱 　　栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim来源于葫芦科栝楼属，其果实、种子和根均可入药，果实入药称之为瓜蒌，是主治胸痹的良药；根入药俗称天花粉，具有清热生津、消肿排脓的功效。除传统药用价值外，栝楼还具有良好的保健和食用价值，开发前景广阔[1]，因此各地大量引种。山东是栝楼的主产区，生产上以种子繁殖为主，山东属典型的暖温带季风气候，春季干燥少雨，为栝楼种子萌发带来严峻挑战。因此，栝楼种子种苗的抗旱性是栝楼种质资源和品种选育的重要方向。 　　超微形态和结构的观察比较在种质鉴定方面的应用日趋广泛。本研究选择生产上2个主要栽培的栝楼品系（编号KXY-001，KXY-005）为研究对象，采用扫描电镜观察比较2个栝楼品系种子表面超微结构，采用聚乙二醇（PEG-6000）模拟不同程度的干旱胁迫，比较不同品系栝楼应对干旱胁迫的生理适应性反应，为栝楼种质资源鉴定及抗旱品种选育提供依据。 　　1材料 　　实验材料来源于山东济南禾宝中药材有限公司栝楼生产基地，经山东中医药大学周凤琴教授鉴定为葫芦科栝楼属栝楼T. kirilowii。本研究选择生产上2个主要栽培的栝楼品系（编号 KXY-001，KXY-005，生物学特性见表1），均为果实用栝楼。其中KXY-001，果型较大，圆球形，直径约8～12 cm，表皮白绿色，皮薄，籽粒饱满；KXY-005，果型较小，椭圆形，直径约6～10 cm，表皮网状墨绿色，皮厚。2012年11月份采收后，分别将2个品系种子取出，晾干备用。 　　2方法 　　2.1种子的扫描电镜观察 　　选择饱满典型的种子，经超声波清洗机清洗，除去种子表面灰尘、杂物及其他附着物，然后在体视显微镜下分别粘贴于扫描电镜样品台的双面胶纸上。真空喷镀金膜， 最后移入Fesem型扫描电镜样品室，在20 kV 加速电压下观察。着重观察种子整体形态、表面纹饰、凸起纹理、种脐性状等。 　　2.2PEG模拟干旱胁迫 　　分别选取籽粒饱满、大小均一的2个栝楼品系的种子，用10% H2O2消毒15min，蒸馏水冲洗3～4次，晾干备用。用PEG-6000分别配制成质量分数为10%，20%，30%的溶液，分别将栝楼种子置于铺有2层滤纸且已用处理液润湿的培养皿中，每皿10粒，对照组用不含PEG-6000的蒸馏水培养，于25 ℃光照培养箱中培养，从实验当日起，每天记录种子萌发数（以胚根顶出种皮为发芽标准），适时补充处理液，将连续5 d不再有种子发芽的时间作为种子发芽结束期，发芽率=正常发芽的种子数/供试种子数×100%。待种子发芽结束后，每皿中选择大小一致的栝楼幼苗检测地上部分MDA、叶绿素及抗氧化物酶活性，混合取样，每皿作为一个重复，每个处理6个重复。 　　2.3测定指标 　　栝楼幼苗中MDA含量采用硫代巴比妥酸比色法[2]进行测定。栝楼幼苗中叶绿素含量采用紫外吸收法[3]进行测定。栝楼幼苗中SOD活性采用核黄素-NBT法[4]进行测定。以每毫克蛋白质每分钟抑制光化还原50%的氯化硝基氮蓝四唑（NBT）为1个酶活性单位（U），酶活性以U?mg-1蛋白质表示。栝楼幼苗中POD活性采用愈创木酚比色法[5]进行测定。以每毫克蛋白质每分钟A470变化0.01为1个过氧化氢酶活性单位（U），酶活性以U?mg-1蛋白质表示。栝楼幼苗中CAT活性采用紫外吸收法[6-7]进行测定。以每毫克蛋白每分钟A240减少0.01的酶量为1个酶活单位（U）表示，酶活性以U?mg-1蛋白质表