医学毕业论文--免疫抑制小鼠肺白色念珠菌病病理研究.docVIP

PAGE \* MERGEFORMAT 1 免疫抑制小鼠肺白色念珠菌病病理研究 作者：王革新 王馥香 刘安丽 【摘要】 目的：通过建立免疫抑制小鼠肺白色念珠菌病动物模型，研究肺念珠菌病病理改变，探讨念珠菌致肺部病理改变的机制。方法：从临床重症病人体内分离、鉴定、纯化白色念珠菌，并制备成2.0×109 CFU/mL菌液;免疫抑制小鼠后经气道接种法、口饲给菌法、腹腔注射法、尾静脉注射法建立小鼠肺部感染白色念珠菌病模型，观察小鼠临床症状，并用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖观察并取材，经病理切片观察肺部病变。结果：白色念球菌感染后小鼠出现异常行为，肉眼观肺脏体积增大、肺切缘呈钝角、颜色苍白、表面多个粟粒状灰白色斑点，镜下可见肺泡壁毛细血管高度扩张充血、肺泡间隔增宽、间质水肿、肺泡腔扩张、肺泡上皮增生和空泡变性、肺泡腔内充满淡红色水肿液。结论：可通过免疫抑制小鼠气道接种白色念珠菌法获取肺白色念珠菌病动物模型，用于研究肺部白色念珠菌致病理改变的机制。 【关键词】 免疫抑制;小鼠;白色念珠菌;病理 假丝酵母菌(Candida)又称念珠菌，广泛分布于自然界，是较常见的条件致病菌。临床资料显示，白色念珠菌(C.albicans)构成对多种慢性消耗性疾病，特别是糖尿病、自身免疫病、癌症以及艾滋病患者的主要威胁。近年来由于器官移植、导管术的应用、抗菌药物、激素和免疫抑制剂在临床上的大量使用，使机体抵抗力减弱，白色念珠菌感染日益增多，血培养阳性仅次于大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌。白色念珠菌致病力强，机体抵抗力减弱是白色念珠菌入侵的主要原因。近年来在真菌感染疾病中，白色念珠菌虽有所下降，但仍约占念珠菌感染70 %～80 %[1]。 　　念珠菌易侵犯呼吸道，致使肺部念珠菌感染发生增多[2]。支气管、肺念珠菌病的感染系从口腔直接蔓延或经血行播散而来，多为继发感染，临床表现为慢性支气管炎、肺炎或类似肺结核的空洞形成，主要症状包括低热、咳嗽、痰少而粘稠，或粘液胶质样不易咳出，有时带血丝甚至咯血。损害扩展时症状加重，出现高热、胸痛甚至胸腔积液、呼吸困难[1]。本课题组通过建立免疫抑制小鼠肺白色念珠菌病动物模型，模拟白色念珠菌经口腔直接蔓延所致肺念珠菌病，研究肺白色念珠菌病的肺部病理改变。 　　1 材料与方法 　　1.1 从临床重症病人体内分离、鉴定、纯化白色念珠菌 患者为南阳医专一附院儿科新生儿，诊断为新生儿肺炎，持续发热10 d，抗生素治疗无效，遂于当天上午抽血，用生物梅里埃公司生产的小儿中和抗生素需氧血培养瓶，放入Bact/ALERK全自动血培养仪 (生物梅立埃中国有限公司生产)中培养，经24 h该仪器显示该标本阳性。转种血平皿，35 ℃培养24 h可见血平板上长出中等大小、乳白色湿润菌落。涂片革兰染色镜检，可见厚膜孢子。该真菌芽管试验阳性，初步鉴定为真菌。进一步鉴定，科玛嘉念珠菌显色板培养菌落呈绿色,鉴定为白色念珠菌。后经糖发酵实验发现，葡萄糖、麦芽糖、蔗糖为阳性，乳糖阴性;糖同化实验发现，葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖为阳性，乳糖阴性;确定为白色念珠菌。 　　1.2 用纯化菌种制备菌液 在超净工作台上从血平板上挑取单个菌落，用灭菌生理盐水在无菌管中制备成2.0×109 CFU/mL的菌液。整个过程注意无菌操作，防止杂菌进入。 　　1.3 动物分组并制备免疫抑制小鼠 选择昆明种清洁级小鼠(武汉乔和动物养殖中心提供)100只，体重25±3 g，不分雌雄，随机分为5组，每组20只。其中4个组(80只)于第1天、第3天、第5天、第7天、第9天给小鼠背部皮下注射环磷酰胺100 mg/kg，制备免疫抑制小鼠。 　　1.4 建立免疫抑制小鼠肺白色念珠菌病动物模型 第1组为对照组，健康小鼠正常条件下气道给菌;第2组为免疫抑制小鼠，气道接种给菌法接种白色念珠菌;第3组为免疫抑制小鼠，口饲给菌法接种白色念珠菌;第4组为免疫抑制小鼠，腹腔注射方式给菌;第5组为免疫抑制小鼠，尾静脉注射方式给菌。第3天开始5个组同时按不同的方式每天给菌，菌量为0.01 mL/只。 　　1.5 制做肺组织切片 于第3天起每天用颈椎脱臼法处死各组小鼠2只，检查肺脏大小、颜色，取肺脏用10 %的福尔马林固定，经酒精逆行梯度脱水、二甲苯透明、常规石蜡包埋、德国美康切片机5 μm连续切片、HE染色，用显微镜观察肺组织病理学变化。 　　2 结果 　　2.1 给菌后小鼠症状 白色念珠菌感染后小鼠出现行走减慢直至行动困难、精神萎靡不振、相互打斗嬉闹现象减少至消失、嗜睡、钻入笼底垫料内静卧、饮水及饮食不佳、呼吸困难、气喘。 　　2.2 肉眼观察 对照组健康小鼠出现1例肺部病变;第2组(免疫抑制小鼠气道接种组)小鼠口腔、鼻腔粘膜及鼻外周部可见块状白色炎性假膜，20只小鼠处死后解剖可见全部出现肺脏体积增大、肺切缘呈