MODS技术快速检测莫西沙星对结核菌药物敏感性的研究.docVIP

MODS技术快速检测莫西沙星对结核菌药物敏感性的研究 　　【摘要】 目的：探讨显微镜观察药物敏感性技术（MODS）快速检测莫西沙星（Mfx）对结核分枝杆菌（MTB）药敏试验的效果。方法：使用MODS技术测定66株MTB临床分离株Mfx耐药性，并与传统罗氏绝对浓度法药敏结果进行比较。结果：本法与罗氏绝对浓度法药敏结果相符63株，不符3株，符合率为95.5%；如以罗氏药敏结果为判断标准，则使用MODS技术检测Mfx对MTB的敏感性、特异性、准确性分别为100%、96.4%、95.5%。结论：MODS技术检测Mfx耐药性具有快速、操作简便、价廉等优点，可作为结核分枝杆菌Mfx耐药性的检测新方法之一。 　　【关键词】 分枝杆菌； 莫西沙星； 耐药性； 显微镜观察药物敏感性技术 　　中图分类号 R446.5 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2013）30-0139-02 　　结核病是世界上主要的传染病，近年来结核病疫情上升的重要原因之一就是耐多药结核分枝杆菌的出现，导致耐多药结核病（MDR-TB）的暴发流行。因为常用喹诺酮类药物如左氧氟沙星在MDR-TB耐药率达40%以上[1]，严重限制了其在临床使用，而Mfx是一种新型8-甲氧基喹诺酮类药物，具有良好的体外抗结核分枝杆菌活性，但因为同属喹诺酮类药物，交叉耐药可能性较大，因此需要开展Mfx对MTB的敏感性检测，由于传统的药敏检测方法耗时长，不能达到临床快速诊治的要求，因此需寻找新的快速的Mfx对MTB敏感性检测技术。笔者使用显微镜观察药物敏感度检测技术（MODS）对MTB的生长情况进行观察，并对快速检测Mfx敏感技术的准确性与罗氏药敏结果进行比较，来评估该技术检测Mfx敏感性的实用价值，结果如下。 　　1 材料及方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 菌株 66株MTB临床分离株均来自笔者所在医院菌株库保存菌株，经过生化技术鉴定为MTB。 　　1.1.2 药物 Mfx针剂（拜尔公司），将Mfx配置成浓度为5 mg/ml的药液后，分装保存备用。 　　1.1.3 培养基 （1）L-J培养基：按《结核病诊断细菌学检查规程》制备[2]。（2）液体培养基：美国Difico公司生产的7H9液体培养基。 　　1.1.4 仪器 倒置显微镜，细胞培养板（上海市肺科医院引进）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 MODS技术检测MTB对Mfx耐药性 参照文献[3]方法，利用细胞培养板，检测每株菌株时均按照需要设置多个含药孔并同时设置两个阴性对照孔，两个阳性对照孔。用7H9液体培养基将待检菌株进行磨菌，并将菌液浓度调至3×103 CFU/ml，在对照孔和含药孔内各加入待检菌液0.4 ml，然后加入0.4 ml Mfx药液。Mfx药物终浓度选择试验分别采用0.0625 μg/ml、0.125 μg/ml、0.25 μg/ml、0.5 μg/ml、1 μg/ml、2 μg/ml、4 μg/ml系列梯度倍比稀释，无药对照孔加入0.4 ml的7H9液体培养基，试剂对照孔加入0.4 ml生理盐水以及0.4 ml 7H9液体培养基。用胶带将培养板密封后装进专用塑料袋，然后放入37 ℃的温箱，培养第3天开始使用倒置显微镜下进行观察，1周左右判断药物敏感结果。如果对照孔内观察到索状结构生长，加Mfx孔内无索状结构生长，判定该菌株对Mfx敏感；如加Mfx孔内有索状结构生长，则判定该菌株耐药。 　　1.2.2 MIC测定 根据本院预试验并参照文献[4]，Mfx的耐药性判定标准如下：Mfx≥0.25 μg/ml。 　　1.3 检测结果判定 　　MTB在液体培养基中生长可形成特征性索状结构，见图1、图2，使用倒置显微镜能进行观察。观察结果时，如果对照孔内观察到无索状结构生长，说明无MTB生长，反之为MTB培养阳性。加药孔内有索状结构生长，判定该菌株对Mfx耐药；加药孔内无索状结构生长，判定该菌株对Mfx敏感。 　　2 结果 　　2.1 罗氏药敏与MODS结果比较 　　采用MODS技术检测66株MTB的Mfx敏感性，并与罗氏药敏结果对比，两种药敏方法结果相符合63株，不符合3株，符合率为95.5%（63/66）；如以罗氏药敏结果为判断的金标准，则MODS技术检测Mfx药敏的敏感性为100%（11/11），特异性为96.4%（53/55），准确性为95.5%（63/66），见表1。 　　2.2 罗氏药敏与MODS所需时间对比 　　罗氏药敏一般需3～4周才能判定结果，而使用MODS技术检测66株Mfx药敏，其中的62株在1周内获得药敏结果。 　　3 讨论 　　目前结核分枝杆菌耐药检测技术较多，如金标准罗氏药敏技术、基因检测技术、结核自动快速培养仪器、液体培养及药敏技术等，但部分检