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中药多糖质量控制的研究进展 　　[摘要] 本文就近年来常见中药多糖质量控制方法，在总糖含量测定方法、分子量大小和分布测定方法、单糖组成和摩尔比测定方法、杂质检测方法等方面进行综述，希望能够为中药多糖的研究和开发提供一定的参考。 　　[关键词] 多糖；质量控制；总糖含量；分子量；单糖 　　[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）02（a）-0159-06 　　多糖由10个或10个以上单糖通过缩合而形成的链状结构的物质。在自然界中，植物、动物、微生物和海洋生物中都有多糖的存在。近年来，已发现不少多糖类物质具有很好的生物活性，如抗肿瘤、免疫促进活性、抗病毒、降血糖、抗凝血等[1]。多糖的多样化生物活性使多糖类药物的开发与研究成为了当前新药研究的热点。 　　多糖质量控制的问题是多糖类新药研发中的瓶颈问题[2]。多糖是一类分子量相对较大的物质，其结构与蛋白质类似，也可分为一级结构、二级结构、三级结构、四级结构，而多糖的生物与其初级结构和高级结构都有密切的关系。多糖的一级结构就包含分子量大小及分布、单糖组成及摩尔比、糖苷键链接方式、重复结构单元和分支度等多方面的问题。这些问题使多糖的定性和定量检测成为一个很大的难题。现就多糖质量控制的问题，在总糖含量测定方法、分子量大小和分布测定方法、单糖组成和摩尔比测定方法、杂质检测方法等方面进行综述。 　　1 多糖中总糖含量测定方法 　　多糖的总糖含量决定了其纯度，是多糖药物质量控制最基本的问题。多糖总糖含量测定一般利用单糖的缩合反应进行显色后用比色法测定；也有直接采用高效液相色谱法（HPLC）测定多糖含量[3]，但由于缺少标准对照和有效检测手段等因素，该方法并未得到广泛认同。 　　1.1 苯酚/硫酸法 　　多糖在浓硫酸作用下，迅速水解脱水生成糠醛或糠醛类似物，然后与苯酚缩合生成1种红色化合物，在一定范围内生成物颜色深浅和多糖中总糖含量成线性关系，由此来测定多糖中总糖含量。该法所采用试剂的价格便宜，蛋白质等物质不干扰测定，灵敏度高，故被广泛采用[4-7]。该法需要注意的问题有：己糖在显示后最大吸收波长一般在490 nm处，戊糖和糖醛酸显示后最大吸收波长一般在480 nm处；苯酚在空气中易氧化生成醌类物质，导致吸收波长发生偏离或吸收值不稳定，所以苯酚在使用前一般宜进行重蒸馏，且需要现配现用；不同多糖在使用该法时，苯酚、硫酸用量、反应温度和时间等都需要进行优化。 　　1.2 蒽酮/硫酸法 　　多糖在浓硫酸作用下，迅速生成糠醛或糠醛类似物，然后与蒽酮缩合生成一种蓝绿色化合物，在一定范围内生成物颜色深浅和多糖中总糖含量成线性关系，由此来测定多糖中总糖含量。该法和苯酚/硫酸法的不同是一些蛋白质类物质会干扰总糖含量的测定，所以在测定前一般需要通过前处理去掉样品中的蛋白质。该法需要注意的事项有：糖与蒽酮形成的有色物质最大吸收波长一般在625 nm处；蒽酮-硫酸溶液需要现配现用。该法操作步骤较苯酚/硫酸法更为简单方便[8-10]。 　　1.3 3，5-二硝基水杨酸（DNS）比色法 　　多糖水解后生产的还原糖与DNS在中性或碱性条件下生成生成3-氨基-5-硝基水杨酸，显棕红色，在一定范围内，反应产物的颜色深浅和还原糖的量成线性关系，由此可用于测定多糖样品中还原糖的含量。该法可测定多糖样品中游离还原糖的含量；同时也可将多糖水解后，测定多糖中总糖的含量。3-氨基-5-硝基水杨酸一般在540 nm处有最大吸收[11-12]。该法不需要用到强酸，反应相对较为温和。 　　1.4 地衣酚/盐酸法 　　多糖在盐酸作用下水解脱水生成糠醛和糠醛衍生物，然后和地衣酚结合生成有色化合物，最大吸收波长一般在660 nm处，其颜色深浅和多糖的量成线性关系，由此可用于多糖样品中总糖含量的测定[13]。这种方法一般用于戊聚糖含量的测定。相对前面3种方法，这种方法使用较少。 　　1.5 滴定法 　　有斐林滴定法和间接碘量法等[14-15]。斐林滴定法的原理是将质量浓度为0.1 g/mL氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05 g/mL硫酸铜溶液等量混合，硫酸铜和氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀，再与酒石酸钾钠发生反应，生成酒石酸钾钠铜络合物。加热条件下，用多糖样品液滴定，多糖液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成氧化亚铜沉淀，氧化亚铜再与试剂中的亚铁氰化钾反应生成可溶性的化合物，用次甲基兰作指示剂，达到反应终点时，稍过量的还原糖将次甲基兰还原，反应液由蓝色变为无色，即为滴定终点，然后根据多糖液消耗量可计算出多糖液中还原糖的量。该法注意事项有：要求滴定在沸腾状态下进行，操作繁琐。间接碘量法是一种容量分析法，以氧化还原反应为基础，与苯酚/硫酸法和蒽酮/硫酸法相比，操作过程繁琐；而且