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BZR1基因表达的模式分析 　　摘 要：花药是被子植物产生雄性配子体的重要生殖器官，它的正常发育对植物的繁衍和传代非常重要。而植物生长发育的每一个阶段，从种子萌发到开花结果，都受到体内激素的调控。目前，包括生长素在内的六大植物激素及其相应的信号调控通路参与调控植物生长发育过程的功能和机制研究已经被广泛报道。其中，芸苔素（brassinosteroids， BRs）是植物中一种促进生长的甾体激素，在拟南芥（Arabidopsis thaliana）中的相关遗传学研究奠定了BR在植物发育过程中的重要地位，BR合成以及信号传导通路的相关基因也被报道在植物营养生长、叶片发育、开花、光形态建成以及雄性生殖等过程中发挥重要作用。目前，这些基因参与调控花药发育背后的具体机制尚不清晰。我们通过运用mRNA原位杂交的方法分析了芸苔素信号通路中编码了转录因子的重要基因BZR1在拟南芥不同发育时期的花药中的表达模式，为BR信号通路调控雄蕊发育的机制研究提供了新的认识和重要的参考。 　　关键词：拟南芥；花药；芸苔素；BZR1；转录因子 　　中图分类号：Q789 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2017）23-0199-04 　　雄性生殖在开花植物繁衍传代的过程中发挥关键作用，对农作物的产量有重要的影响。雄性不育是指植物体中雄蕊发育由于受到内、 外因素的影响而发育不正常的现象，这种现象会严重影响作物产量。研究植物雄性生殖器官花药的正常发育过程以及揭示参与调控这一过程的重要基因的功能，对于我们通过遗传改良来增加粮食等作物的产量由重要的意义。 　　拟南芥植株小且产生的种子多，非常适合作为模式植物来进行遗传学研究。拟南芥是十字花科植物，拥有六个雄蕊，四长两短，四个较长的雄蕊被称为四强雄蕊。雄蕊由花丝和花药两部分组成。根据细胞形态学特征，前人将拟南芥花药的发育过程总共分成14个阶段：发育到第5期时，具有四角结构的花药原基孢子体细胞开始分化形成了由表皮?印⒛谄げ恪⒅屑洳恪⑷拚辈悖?这四层体细胞包围小孢子母细胞形成了花药的典型的蝴蝶状结构。第6-7期，小孢子母细胞经过减数分裂形成单倍体小孢子的四分体，四分体被胼胝质层包裹。花药发育进入第8期时，胼胝质酶复合体降解了胼胝质层，小孢子从四分体中释放出来，孢粉素等物质随着绒毡层的降解，积聚到花粉母细胞表面，慢慢形成花粉壁。在第9到12期，经过两次有丝分裂，三核的花粉粒形成；此后，花药开裂，成熟花粉释放。 　　在拟南芥中，绒毡层是一层特殊的细胞层，该类细胞内含较多的RNA和蛋白质，并有油脂和类胡萝卜素等营养物质，为花粉粒发育提供了所需养料和信号分子。在花药的正常的发育中，绒毡层细胞分裂、分化成体细胞层，包围花粉母细胞（PMCs），绒毡层细胞的形成对成熟花粉的形成和释放有直接的作用，因此直接决定了雄蕊的育性，进而影响植株的雄性育性。在花药发育的第5期，各层细胞命运决定后，绒毡层细胞的超微结构与其他孢子体细胞并没有明显的差异。而在减数分裂期间，绒毡层细胞的细胞质则变得浓密，其中充满了核糖体、线粒体、内质网、高尔基体等等，显示其代谢高度活跃。减数分裂完成后，小孢子外的胼胝质在绒毡层分泌的胼胝质酶作用下降解，小孢子从四分体中释放出来并开始发育成熟，而绒毡层进一步特化为海绵状的细胞，分泌小泡释放小孢子发育所需要的蛋白质、脂类及其他营养物质。在花粉第一次有丝分裂完成 时，绒毡层细胞开始降解，细胞膜破裂，细胞残余与脂体释放到花粉表面成为对花粉粘着和信号识别很重要的花粉包被。 　　近些年国内外以拟南芥为材料，在花药发育过程中的分子调控机制研究取得了一定的进展，发现了多个雄性不育的突变体并克隆了相关基因，包括重要的转录因子如：DYT1、AMS和TDF1。DYT1在花药发育的第5期和第6期有较高的特异表达，dyt1突变体绒毡层细胞出现提前的异常空泡化，向药室内部挤压且无法顺利降解，生殖细胞不能发育形成成熟花粉粒。TDF1编码一个在绒毡层、减数分裂细胞以及小孢子细胞中高表达的转录因子，TDF1突变后，突变体花药的绒毡层细胞无法进一步分化并分泌胼胝质酶，从而导致小孢子母细胞的提前降解。AMS编码了对于花药绒毡层与减数分裂后小孢子发育至关重要的转录因子，在ams突变体中，绒毡层细胞在四分体被释放后出现空泡化，小孢子在四分体时期后逐渐降解。 　　芸苔素最早由Michelle于1970年发现，他从油菜（Brassica napus）花粉中提取出了一种能促进植物茎杆伸长和细胞分裂的高活性物质，将其称为芸苔素（brassinolide，BL），芸苔素可以强烈诱导细胞的生长和分化，此后，具有与BL相似结构和活性的甾体分子不断被发现，统称为芸苔素甾醇（brassinosteroids，BRs）。随后，在拟南芥中，大量BR 相关的