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临床微生物学：涂片找抗酸杆菌 （改良碱性复红法） 第1版第0次修改 第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页 PAGE 玉溪市人民医院 检验科微生物室 临床微生物学检验SOP文件 项目名称：涂片找抗酸杆菌 （改良碱性复红法） 编号：YX-CX-XJ-001 日期：2004年10月 日 1 方法:改良碱性复红法。 2 原理：结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层脂或脂质之皮膜不易着色，但一经着色后酸或乙醇的作用亦是不容易把它脱色。利用这特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸及乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色（红色）。 3 试剂 3.1 妻纳石炭酸复红溶液 碱性复红乙醇饱和溶液 10ml 5% 石炭酸溶液 90ml 3.2 脱色剂 浓盐酸 3ml 95% 乙醇 97ml 3.3 复染液 ( 吕弗勒美蓝液 ) 美蓝乙醇饱和溶液 30ml 10% 氢氧化钾 0.1ml 蒸馏水 100ml 4 试剂贮存：棕色瓶室温存放。 5 质量控制：每批配制后测试，结核分枝杆菌应为阳性。 6 操作步骤 6.1 涂片经火焰固定 , 加石炭酸复红溶液 , 盖满整个痰膜，徐徐加热至有蒸汽出现 , 切不可沸腾。染 5min( 若染色奴卡菌需要加长时间 ), 用清洁水从玻片一端轻缓冲洗 , 冲去染色液 , 沥去剩余的水 。 6.2 加脱色剂 , 不时摇动玻片至无红色脱 落为止 , 用清洁水从玻片一端轻缓冲洗 , 冲去染色液 , 沥去剩余的水 。 6.3 加复染液 , 染 0.5~lmin, 用清洁水从玻片一端轻缓冲洗 , 冲去染色液 , 沥去剩余的水 。 6.4 干后镜检。分枝杆菌呈红色 , 背景为蓝色。 7 结果判断 找到细菌或略带弯曲的杆菌，单个或平行相聚排列，有的呈分枝状，有的菌体内常有2-5个着色较浓的颗粒，抗酸染色染成红色，即可判断找到抗酸杆菌。 8 报告方法 8.1 抗酸杆菌阴性:连续观察 300 个不同视野 , 未发现抗酸杆菌 ; 8.2 抗酸杆菌可疑:1 一8条抗酸杆菌 /300 个视野 ; 8.3 抗酸杆菌阳性（1+）:3-9 条抗酸杆菌 /100 个视野 ; 8.4 抗酸杆菌阳性(2+):1-9 条抗酸杆菌 /10 个视野 ; 8.5 抗酸杆菌阳性（3+）:1-9 条抗酸杆菌 / 每个视野 ; 8.6 抗酸杆菌阳性 (4+):=10 条抗酸杆菌 / 每个视野。 9 临床意义 用以鉴别细菌：奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，结核杆菌及其它分枝杆菌呈阳性。 10 注意事项 10.1痰液，应留取晨痰，要深痰来自肺部的痰。 10.2脑脊液、尿液、胸水、腹水等应离心取沉渣涂片。 10.3玻片必须无划痕。 10.4镜检至少300个视野，不得少于5分钟。 10.5脱色时间需根据涂片薄厚而定，厚涂片可适当延长，以几乎无红色为度。 11 参考文献 [1]中华人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程 第2版 南京：东南大学出版社，1997. [2]李仲兴、郑家齐、李家宏主编.诊断细菌学.香港:黄河文化出版社,1992. 编写人签名 复审人签名 审批人签名 执行日期 姓 名： 编写日期：2004年8月 姓 名： 交审日期：2004年9月 姓 名： 审批日期：2004年10月