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产后蒜薹灰霉病菌产毒条件的研究 　　摘要：由灰葡萄孢霉引起的蒜薹灰霉病是贮藏期蒜薹的重要病害之一。灰葡萄孢霉可以产生真菌毒素，为明确灰葡萄孢霉的最佳产毒培养基和培养时间，本研究从蒜薹主产区采集的蒜薹灰霉病病样上分离到灰葡萄孢霉强致病菌株BC-3，通过黄瓜种子萌发生长法、叶片圆盘法、蒜薹悬滴接种法及系统侵染法4种方法测定灰葡萄孢霉毒素对黄瓜和蒜薹的生物活性。结果表明，蒜薹灰葡萄孢霉毒素为非寄主选择性毒素，最适产毒培养基为马铃薯葡萄糖培养基和淀粉酵母培养基，培养时间为12～18 d。 　　关键词：蒜薹；灰霉病；灰葡萄孢霉；培养条件；真菌毒素；生物活性 　　中图分类号：S436.33 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2017）07-0116-04 　　Abstract The grey mold on garlic scape infected by Botrytis cinerea is one of the main fungal diseases during the storage of garlic scape. The pathogen Botrytis cinerea can produce mycotoxin. In order to research the optimum medium and culture time of mycotoxin production of Botrytis cinerea， the Botrytis cinerea BC-3 with high pathogenicity isolated from garlic scape was selected for target strain in this study. The bioassay of crude toxin was detected by germination-growth of cucumber seeds， plant leaf disc test， garlic scape droplet inoculation and scape wilting method. The results showed that the toxin of Botrytis cinerea was nonhost-selective toxin， the optimal medium for mycotoxin production was potato glucose medium and starch yeast medium， and the culture time was 12～18 days. 　　Keywords Garlic scape； Grey mold； Botrytis cinerea； Culture condition；Mycotoxin； Bioassay 　　灰葡萄孢霉（Botrytis cinerea）是引起产后蒜薹灰霉病的重要致病病原之一[1，2]，严重威胁蒜薹贮藏和市场供应。灰葡萄孢霉常在植物发育早期侵入宿主，并在相当长时间内保持沉默，直到宿主植物生理发生变化有利于其生长时，引发宿主软腐、组织坏死。究其原因是由于灰葡萄孢霉在与宿主植物相互识别、相互作用的过程中会产生次生代谢产物――真菌毒素，毒素在致病过程中会起决定因子的作用[3，4]。1974年灰葡萄孢霉产生的二环倍半萜烯类毒素Botrydial最早被分离鉴定出来，经检测Botrydial的毒性很高，其它毒素多为其前体或衍生物[5，6]。检测发现被灰葡萄孢霉侵染的宿主植物出现伤口后，植物组织细胞中就可以检测到Botrydial，但植物本身并不能分泌这种化合物。随着植物叶片上萎黄程度增高，检测到Botrydial的量也增加，所以灰葡萄孢霉分泌的二环倍半萜类毒素被认为是灰霉病致病的关键因素，这些毒素可以引发宿主植物萎黄病和组织细胞破裂[7]。 　　目前，关于灰葡萄孢霉毒素的分离提取、活性成分?b定方面已有部分研究报道[8]，发现灰葡萄孢霉产生的毒素Botrydial是非寄主选择性毒素[9]，但研究显示侵染蒜薹和黄瓜的灰葡萄孢霉在菌株的生物学、致病力上都存在显著差异[10-12]。而目前对采后蒜薹灰葡萄孢霉毒素的研究报道较少，且毒素对采后蒜薹的致病作用方式尚不明确。据此，本试验对蒜薹灰葡萄孢霉的产毒条件及毒素对蒜薹和黄瓜活性进行研究，以期找到该病原菌产毒的最适培养条件和毒素活性评价方法，为产后蒜薹灰霉病毒素致病机制等方面的研究奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试菌株 　　采集产后蒜薹灰霉病典型发病样本，按常规组织分离方法分离获得病原菌，经纯化获得蒜薹灰霉病菌纯培养菌株10株。依据柯赫氏法则进行致病性