从植物共生菌宏基因组文库筛选新生物催化酶基因.PDFVIP

微生物学通报 MAY 20, 2012, 39(5): 661−667 Microbiology China © 2012 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 从植物共生菌宏基因组文库筛选新的 生物催化酶基因 1,2 1 1,2 1 1* 付小莉 王浩鑫 陈倩倩 赵沛基 曾英 (1. 中国科学院昆明植物研究所 云南 昆明 650201) (2. 中国科学院研究生院 北京 100049) 摘 要: 【目的】通过建立宏基因组文库的高通量保存与基于探针洗脱的多次膜杂交筛 选方法, 从植物共生菌宏基因组文库筛选具有生物催化潜力的新酶基因。【方法】首先根 据滴度将初始文库噬菌体包装颗粒感染到 EPI300™-T1R E. coli , 过夜培养后对应保存于 96 孔板; 提取粘粒进行文库的杂交筛选。【结果】描述的洗脱条件可完全去除尼龙膜上与 靶DNA 结合的探针, 并且尼龙膜上的靶DNA 至少可用于7 次探针杂交, 从而明显提高宏 基因组文库的筛选效率。【结论】以Enoate reductase (ER)和短链脱氢酶(SDR)的同源基因片 段为探针, 运用该方法经两轮筛选获得候选单克隆并进行了部分粘粒的测序, 发现了新的 ER 和SDR 同源基因, 并克隆到相应的全长基因序列用于后续的表达与酶化学研究。 关键词: 宏基因组, 探针洗脱, 生物催化剂, 短链脱氢酶, Enoate reductase Screening of new genes with biocatalytic potential from a plant microbiota metagenomic library FU Xiao-Li1,2 WANG Hao-Xin1 CHEN Qian-Qian1,2 ZHAO Pei-Ji1 ZENG Ying1* (1. Kunming Institute of Botany , Chinese Academy of Sciences, Kunming , Yunnan 650201, China) (2. Graduate University of the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China) Abstract: [Objective] We aim to find the new genes with biocatalytic potential from the plant microbiota metagenomic library by the means of high-throughput screening combined with 基金项目：国家自然科学基金项目(No.; 植物化学国家重点实验室基金项目(No. P2009-ZZ02) *通讯作者：Tel: 86-871-5223210; : biochem@ 收稿日期：2012-02-27; 接受日期：2012-03-01 662 微生物学通报 2012, Vol.39, No.5 multiple hybridizations b