DNA复制-6幻灯片.pptVIP

复制起始阶段的特点 真核细胞：具有多个 起始位点 原核细胞：仅有一个复制起始位点，但往往是双向复制 链的延长 引物合成后，由DNA polⅢ（真核细胞为DNA聚合酶?或?)催化，在引物3-OH末端逐一添加与模板链对应互补的脱氧核苷磷酸,使新合成的链不断延长。 领头链:链的延长方向(5 ? 3)与解链方向(复制叉移动方向)相同, 为连续合成。 随从链: 链的延长方向(5?3)与解链方向(复制叉移动方向)相反，为不连续合成。 分段合成的DNA片段, 最初被命名为冈崎片段 或领头链 III 三、DNA复制的半不连续性 前导链 滞后链 冈崎片段 前导链：以3’ → 5’ 方向的亲代链为模板连续合成的子代链。 滞后链：以5’ →3’方向的亲代链为模板的子代链先逆复制叉移动方向合成冈崎片段，再连接成滞后链。 DNA链的延伸 在DNA聚合酶Ш的催化下，以四种5’ -脱氧核苷三磷酸为底物，在RNA引物的3’端以磷酸二酯键连接上脱氧核糖核苷酸并释放出焦磷酸。DNA链的延伸同时进行前导链和滞后链的合成。两条链方向相反。 前导链 滞后链 冈崎片段 半不连续复制 冈崎模型 复制的终止 1.水解引物及填补空隙 冈崎片段合成后，由DNA polⅠ(真核细胞可能是DNA聚合酶?)水解去除RNA引物，并填补留下的空隙(5? 3)聚合。 2.完整双链DNA分子的形成 填补空隙后，DNA片段与片段之间还有一个缺口(一个3,5-磷酸二酯键的长度), 由DNA连接酶催化连接成完整的链，从而产生完整的双链DNA分子。 DNA复制的精确性（高保真复制） 1、碱基的配对规律：摸板链与新生链之间的碱基配对保证碱基配错几率约为1/104～1/105。 2、DNA聚合酶的3’→5’外切酶活性的校对功能，使碱基的错配几率又降低100～1000倍。 3、DNA的损伤修复系统。 DNA复制必须具有高度精确性，在大肠杆菌的细胞DNA复制中其错误率约为1/109～1/1010，即每109～1010个核苷酸才出现一个错误，也就是大肠杆菌染色体DNA复制1000～10000次才出现一个核苷酸的错误。这么高的精确性的保证主要与下列因素有关： 二、反转录(reverse transcription) 概念 以RNA为模板，dNTP为原料，反转录酶催化，按碱基配对规律合成DNA的过程。 反转录酶, 又称为依赖RNA的DNA聚合酶 (RNA-dependent DNA polymerase, RDDP) DNA 转录 RNA RNA(病毒) 反转录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . RDDP 引物, 4种dNTP RDDP RNase H 4种dNTP RDDP或DDDP 病毒RNA RNA-DNA 杂化分子 cDNA 前病毒 (双链DNA) 酶催化反应示意图 反向转录酶存在于所有致癌RNA病毒中, 其功能可能与病毒的恶性转化作用有关; 但它也存在于某些正常细胞中，在细胞分化与胚胎发生中可能起某些作用。 反转录病毒和反转录酶的发现, 提出了一个重要的医学问题──病毒致癌及癌基因 反转录的医学意义 反转录的医学意义 癌基因(oncogene):能在体外引起细胞恶性转化,在体内诱发肿瘤的基因. 细胞癌基因(c-onc)或原癌基因(pro-onc): 存在于生物正常细胞基因组中的癌基因. 正常情况下基因处于静止或低表达的状态. 当受到致癌刺激被活化并发生异常时则可发生细胞癌变. 病毒癌基因(v-onc): 存在于致瘤病毒中的能使靶细胞发生恶性转化的基因. 用三个小写字母表示癌基因名称,如myc, fos, ras, src等 抑癌基因: 是一类抑制细胞过度生长,增殖从而遏制肿瘤形成的基因.如Rb,P53,P16等 癌基因与抑癌基因之间一般处于动态平衡状态 是一种反转录病毒, 可引起获得性免疫缺陷综合征(AIDS,艾滋病). 反转录酶在基因工程,分子病的基因治疗方面也有重要作用. 人类免疫缺陷病毒(HIV) 反转录的医学意义 O N H N O C H 3 R P O N H N O C H 3 R O N H N O C H 3 R P N H N O R O C H 3 UV 引起DNA损伤的因素 紫外线(常产生嘧啶二聚体) 电离辐射(断磷酸二酯键) 物理因素 胸腺嘧啶二聚体的产生 第二节 DNA的损伤与修复 一、DNA的损伤 生物体受某些理化和生物等外源性因素或机体内环境改变的影响，引起DNA分子结构的任何异常改变称为DNA损伤(DNA damage) 概念 化学因素：均能干扰复制与转