丽眨埠崭涛藓嘶制的研究.docVIP

丽眨埠崭涛藓嘶制的研究 　　摘　要：为系统探明?崭涛藓朔⑸?的机制，以无核?崭绦缕分掷??2号和普通有核?崭涛?试材，对雌雄配子体的育性和亲和性进行了观察。结果表明，丽??2号花粉发芽率、花粉染色活力和花粉粒数量等与有核对照存在显著性差异，属于低育型花粉。丽??2号花粉母细胞在减数分裂期染色体行为发生了异常，出现较高频率的染色体链及少部分的染色体环和落后染色体。授以高育性的雪柑花粉后，丽??2号仍能形成无核果。切片观察发现，丽??2号胚囊母细胞在四核期已完全退化。因此，胚囊高度败育是丽??2号产生无核的主要原因。 　　关键词：?崭蹋焕??2号；无核机制；花粉育性；胚囊败育 　　中图分类号：S666．2　文献标识码：A　文章编号：1009-9980(2007)04-421-06 　　 　　我国是?崭?(Citrus reticulata Blanco)的原产地和主产国，面积和产量均占世界?崭堂婊?和产量的95％以上，其中有核?崭陶剂撕艽蟮谋壤?。据刘永忠等对我国9个省(市)主产区67份桠柑品质的调查表明，大部分样品饱满种子数还较多，只有少量样品为商业无核(单果种子数平均少于5粒)，因此无核?崭叹哂泻芨叩募壑怠＠??2号是由丽水市农科所和浙江大学园艺系经过8年研究共同选育成功的一个无核?崭绦缕分郑?已于2006年3月通过了浙江省林木品种审定委员会的新品种审定(S－SV-CR-007-2006)，该品种无子率超过99.5％，且表现出树势强、生长快、结果早、丰产、优质、商品性好、耐贮藏等优良性状。 　　 　　对柑橘无核机制的研究前人也做了大量的工作，几乎所有的无核柑橘品种都有阻止种子形成的不育现象，其原因和机制主要有雄性不育、胚囊败育、自交不亲和和胚早期死亡。其中雄性不育是产生无核柑橘最重要、最普遍的原因，已报道的无核或少核类型多数都与花粉育性下降有关；而其中一些无核性状稳定的品种在雄性不育的同时又伴随着程度不同的雌性败育。迄今对?崭讨挥行坌圆挥?方面研究的报道，而未见有关于无核机制系统研究的报道。我们主要从花粉育性、胚囊育性和授粉亲和性等方面进行了较为系统的研究，以期阐明丽??2号的无核成因。 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1．1　材料 　　于2005年和2006年取材2次。试材取自丽水市农科所柑橘试验园，选材系7年生丽??2号无核?崭毯推胀ㄓ泻?崭?(CK)，园区管理水平一致，树势健壮。研究工作在浙江大学农业与生物技术学院果树生物技术实验室进行。 　　 　　1．2　花粉育性相关指标测定 　　选晴天无风的上午，于始花期采集花粉成熟的花蕾，在实验室内用镊子剥取花药，在通风阴凉处自然干燥，收集花粉放入干燥器4℃低温保存。 　　用体积分数70％乙醇消毒过的洁净发丝蘸取花粉，均匀涂抹，分别接种在蔗糖质量分数为10％、15％、20％、25％并添加琼脂质量分数1％、硼酸质量分数0.01％的固体培养基上，置于(25±1)℃的恒温箱中，分别于12、24、48 h测定发芽率，每处理观测10个视野，取其平均值。3次重复。 　　花粉量的测定采用朱更瑞等的方法，并做改良。具体步骤如下：于始花期采集即将成熟的花蕾，在实验室内及时剥取饱满正常未开裂的花药50枚装入刻度试管中，置于37 ℃温箱中，使花药完全爆裂．散出花粉。随后用1 mL?昆合酶液(质量分数2.5％纤维素酶+质量分数1％果胶酶)室温处理花药12 h，再分别加入9 mL蒸馏水和2～3滴吐温，充分振荡摇匀。然后用移液枪吸取2 μL溶液滴于载玻片上，在显微镜下观察，统计花粉数，重复3次。花粉量(粒／花药)=(每载玻片上平均花粉粒总数x500×10)÷50。 　　花粉畸形率和花粉染色活力测定分别采用涂布制片法和I-KI法，计算各自平均值。 　　 　　1．3　花粉形态扫描电镜观察 　　将2个品种新鲜花粉分别均匀散布在粘有导电双面胶的样品台上，喷金镀膜，在环境扫描电镜(Philips XL30-ESEM)下放大500～4000倍，观察拍照。 　　 　　1．4　花粉母细胞减数分裂观察 　　选取近球形、微露白，花药呈浅黄色，直径约3.0 mm的花蕾，卡诺同定液固定。用直接压片法观察染色体，改良卡宝品红染色，镜检、显微照相。 　　 　　1．5　杂交试验 　　授粉于2005年4月25日进行，组合为丽??2号×雪柑：丽??2号×丽??2号。在授粉树的树冠外围、向阳通风和营养条件好、生长健壮的结果枝上选取未开放花朵，人工授粉，套袋挂牌。分别于5月12日和7月25日统计坐果率。果实成熟期统计所有杂交果的种子数。重复3次。 　　 　　 　　1．6　雌配子体育性观察 　　从4月19日始花期开始，选取2～3株健壮树，每天下午13～14时取子房样品1次，共15次