SL-14-核酸生物合成(1)-DNA复制.ppt

14.1 DNA的生物合成(重点) 14.2 RNA的生物合成(重点) 14.3 核酸合成抑制剂（自学） 14.4 基因工程简介（自学） 14.1 DNA的生物合成 14.1.1 DNA的复制（DNA指导下的DNA合成） 14.1.2 逆转录作用（RNA指导下的DNA的合成） 14.1.3 DNA的损伤、修复与突变 14.1.1 DNA的复制 一、复制的基本规律 二、DNA聚合反应有关的酶类 三、原核细胞DNA的复制过程 四、DNA复制的忠实性 五、真核细胞DNA的复制 一、复制的基本规律 复制（replication）? 以亲代DNA分子的双链为模板，按照碱基互补配对原则，合成出与亲代DNA分子完全相同的2个双链DNA分子的过程。 DNA复制的基本规律 方式：半保留复制(semi-conservative replication) 方向：双向复制(bidirectional replication) 特点：半不连续复制 (semi-discontinuous replication) 高保真性(high fidelity) (一）半保留复制的实验依据和意义 什么叫半保留复制？ DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 半保留复制的生物学意义 按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。 遗传的保守性，是物种稳定性的分子基础，但不是绝对的。 （二）双向性 原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 二、参与大肠杆菌DNA复制的酶类 两个特点： DNA 新链生成需引物和模板； 新链的延长只可沿5? → 3?方向进行 。 （一）DNA聚合酶（DNA polymerase） DNA聚合酶(DNA-pol) 这类酶的共同性质: 1.以脱氧核苷三磷酸(dNTP)为前体催化合成DNA; 2.需要模板，按碱基互补原则合成子链; 3.需要引物，不能起始合成新的DNA链;催化dNTP加到生长中的DNA链的3’-OH末端; 4.催化DNA合成的方向是5’→3’； DNA pol II 1970年分离得到； 聚合酶活性：2400base/min； 100分子/cell； 有3’→5’核酸外切酶活性， 没有5’→3’核酸外切酶活性； 在DNA repair 中起作用； DNA pol III “真正”的大肠杆菌DNA复制酶 快：1 000nt/秒/酶 酶量合适 精确 十种亚基（αβγθτδδ’χΨε）组成的不对称二聚体。Αεθ组成核心酶，β2称为夹子，（γ2δδ’χΨ）组成γ复合物，其主要功能是帮助β亚基夹住DNA，故称为夹子装配器，该酶DNA合成的持续能力强，主要与该结构有关。 真核生物的DNA聚合酶 （二）引物酶(primase) ——复制起始时催化生成RNA引物的酶 （三） DNA连接酶(DNA ligase) （四）解旋酶 (helicase) （五）单链DNA结合蛋白（single stranded binding protein，SSB） 作用：防止单链DNA重新形成双链， 防止单链DNA被核酸酶水解。 特点：四聚体，DNA跨度32bp,呈协同效应，不断的结合和解离。 （六）DNA拓扑异构酶 (DNA topoisomerase) 已知：在生物体内，DNA以超螺旋的形式存在。 问：复制时，超螺旋时如何打开的？ ——拓扑异构酶起着重要的作用 复制时，DNA解链沿中心轴反向旋转，因为复制速度快，旋转也快（100次/秒），易导致DNA出现：打结、缠绕和连环。 拓扑异构酶作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键 分 类 拓扑异构酶Ⅰ 拓扑异构酶Ⅱ 三、 原核细胞的DNA复制过程 （一）. 复制的起始（Initiation） （二）. 复制的延伸（Elongation） （三）. 复制的终止（Termination） （一） 、 复制的起始 （一） 复制的起始 DNA 的半不连续复制： Okazakis (1968)； Reiji Okazaki was born near Hiroshima, Japan, in 1930. He was a teenager there at the t