单克隆抗体复习突破的策略.docVIP

单克隆抗体复习突破的策略 　　制备单克隆抗体是动物细胞工程应用的典型实例，涉及动物细胞培养、动物细胞融合技术等多方面技术，其原理还涉及特异性免疫、细胞癌变等知识，所涉及到的知识跨度大，综合性强。整个制备过程既需要复杂的实验条件，又具有特定的技术步骤（尤其是杂交瘤细胞的筛选），是学生学习的重点和难点。该考点与现代生物科技及医学实践联系得比较紧密,是近几年新课标高考的热点。下面就配合典型例题,对这一考点进行讲解、分析,以期广大考生能够共同提高。 　　一、 单克隆抗体的概念 　　复习单克隆抗体概念时，一方面不应停留在概念本身、知识表层，而要努力深挖概念的特点；另一方面除了注重单一知识点的落实，还应该使知识系统化、网络化，可以从“抗体”、 “克隆”、 “单克隆抗体与血清抗体的区别”等方面去理解单克隆抗体的概念。 　　（1） 对抗体的概念的理解：一个（效应）B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 　　（2） 对克隆的概念的理解： 　　“克隆”从英文“clone”音译而来，其定义是无性繁殖系，在生物学领域有3个不同层次的含义。现在引申出的概念是：遗传背景完全相同的一个群体。 　　① 从DNA水平，特定DNA片段通过重组DNA技术插入到一个载体（如质粒和病毒等）中，然后在宿主细胞中进行自我复制所得到的大量完全相同的该DNA片段的“群体”或利用PCR技术扩增DNA。 　　② 在细胞水平，克隆是指由一个单一的共同祖先细胞分裂所形成的一个细胞群体。比如：使一个单一细胞在体外的培养液中分裂为若干代所形成的一个遗传背景完全相同的细胞集体即为一个细胞克隆。又如，在脊椎动物体内，当有外源物（如细菌或病毒）侵入时，会通过免疫反应产生特异的识别抗体。产生某一特定抗体的所有浆细胞都是由同一个B细胞分裂而成，这样一个浆细胞群体也是一个细胞克隆。 　　③ 在个体水平，克隆是指基因型完全相同的两个或更多的个体组成的一个群体。比如：两个同卵双胞胎即为一个克隆。因为他（她）们来自同一个受精卵细胞，所以遗传背景完全一样。生物个体的克隆可分为植物个体的克隆、动物个体的克隆。 　　（3） 单克隆抗体与血清抗体的区别： 　　单克隆抗体：由单个B细胞通过无性繁殖（克隆）形成细胞群，由它们产生出化学性质单一、特异性强的抗体。 　　血清抗体：从动物血清中分离所得的抗体，产量低、特异性差、纯度低，反应不够灵敏。 　　例1单克隆抗体和血清抗体相比，其优越性在于（ ） 　　A. 单克隆抗体能够与抗原特异性结合 　　B. 单克隆抗体能够在体外制备 　　C. 单克隆抗体比血清抗体的特异性强、免疫活性高 　　D. 单克隆抗体制备过程简单 　　解析本题主要考查学生对单克隆抗体的理解，掌握与传统血清抗体的区别。 　　答案C 　　二、 单克隆抗体的制备过程 　　单克隆抗体技术尚处于研究阶段，这项技术包含着细胞培养、动物细胞杂交技术等，是细胞培养和动物细胞杂交技术综合应用。具体制备过程如下： 　　① 取材：反复将特定抗原注入小鼠体内，取出小鼠的脾脏，制成B淋巴细胞悬浮液，同样将取出的骨髓瘤细胞也制作成细胞悬浮液。 　　② 细胞融合：将两种悬浮液混合，加入灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导融合。 　　③ 选出杂交瘤细胞：在特定的选择性培养基中进行筛选，筛选出B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞。 　　④ 选出能够产生所需抗体的细胞群：对杂交瘤细胞进行培养，再从中挑选出能够产生所需抗体的细胞群。 　　⑤ 生产单克隆抗体：培养上述选出的细胞群，在获得足够数量的细胞后，将细胞在体外条件下大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖，再从培养液或小鼠的腹水中提取大量的单克隆抗体。 　　对制备过程的几点说明： 　　① 单克隆抗体制备中，第一次筛选：用选择性培养基筛选出杂交瘤细胞；第二次筛选：通过抗体检测筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。 　　② 杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量增殖，又能产生专一性抗体。 　　③ 抗克隆抗体制备实质：就是将免疫B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。实际上就是利用动物细胞融合技术，是动物细胞融合技术的具体运用。 　　④ 制备单克隆抗体的选材理由：因为效应B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外条件下大量增殖的本领，所以由某种效应B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞，既有效应B淋巴细胞分泌特异性抗体的能力，又具备骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的本领，能够在体外培养条件下大量增殖，并且产生特定的抗体。 　　这部分是单克隆抗体这个知识体系中的重点和难点，学生要有意识将教材中的零碎知识点通过流程图式法、比较整理法等进行深加工，加深理解，促进发散性思维，在解题时能从多方向寻找解决问题的突破口。 　　有关的研究