类固醇化学修饰及其在siRNA体外递送中地研究.pdfVIP

摘要 摘要 基因沉默的现象后，siRNA便因其特异性、高效性等特点很快成为了研究基因 功能和基因表达调控的重要手段，而siRNA的成药便是近年来人们的研究热点。 但由于siRNA本身的不稳定以及体内的复杂环境等原因，siRNA在体内传递时 的完整性、时效性和靶向性是目前研究者们亟待解决的问题，因此想要实现 siRNA作为基因治疗药物的功能就必需对其进行结构稳定性修饰并设计合适的 生物体内给药体系。 类固醇作为天然存在的一类脂溶性小分子，其作为siRNA的给药载体具有 很好的生物相容性和和靶向性等优点，而且类固醇中的胆固醇以及石胆酸在 siRNA递送中的研究也已有报道，只是目前对这一类小分子的系统研究还并不 完善，所以在本文中我们选择了8种类固醇化合物，对它们进行了化学修饰并 通过两种递送体系研究了这一类小分子在siRNA体外递送中的应用： 在第一部分工作中，我们以胆固醇为起始原料，通过一系列的修饰合成了用 研究了其在核酸递送中的潜在应用价值。在实验中我们将“Streptaphage”分子 nM时 与siRNA以3种不同的质量比进行了组装，并在siRNA的工作浓度为83 进行了细胞递送研究。结果显示，在这样较高的siRNA工作浓度下我们的组装 物并没有显示出明显的干扰效果，后续的工作还在进行，此部分工作的另一个 目的便是为我们将来载体的设计以及修饰方式提供方向。 在第二部分工作中，我们以“Streptaphage”的分子结构作为参考，通过对 包含胆固醇在内的八种类固醇进行巯基化修饰并应用巯基迈克尔加成反应来快 速构建了共价结合的siRNA递送体系，目前四种类固醇化合物已经完成了体外 细胞水平的测试。但是实验结果显示，即使当载体修饰的siRNA的-1-f乍浓度为 83nM时，其传递效果仍不是很好。 虽然在目前的实验中并没有达到所预期的结果，但是作为对siRNA递送载 体的初步研究，本文的工作为将来如何对类固醇类载体进行合理的、有效的设 计提供了宝贵经验，相信通过更加系统和深入的研究，此类载体递送体系仍然 摘要 具有重要的理论和应用价值，后面还有很多改进的地方需要我们去努力和探究。 关键词：siRNA，基因治疗药物，给药载体，类固醇。 II Abstract Abstract in doublestrandRNAfromvitro Sincethe of silenceinduced discoverygene by andmelloin1 becamean caenorhabditis fire 998，siRNA elegansby quickly mannerto functionand of dueto important studygene regulationgeneexpression hot onsiRNAhasbecame their and theresearch durg highefficien