第二章 基因工程分子生物学基础.pptVIP

2 基因工程的分子生物学基础 2.1 核酸的结构与功能 2.2 基因与基因组 2.3 中心法则与基因表达调控 2.4 自然界的基因转移和重组 目的要求：掌握基因工程的分子生物学基础 自然界的基因转移和重组 2.1 核酸的结构与功能 2.1 核酸的结构与功能 核酸：就是由许多核苷酸按照一定的顺序连接所组成的多核苷酸，它的主要功能是充当遗传信息的载体。 戊糖 碱基 2.1.1 遗传物质与DNA （1）遗传因子 孟德尔认为生物的性状是由“遗传因子”决定的。 （2）1909年，丹麦生物学家约翰逊根据希腊文“给予生命”之义，创造了基因（gene）一词，并用这个术语代替孟德尔的“遗传因子”。 基因工程理论依据 不同基因具有相同的物质基础 基因是可切割的 基因是可转移的 多肽与基因之间存在对应关系 遗传密码是通用的 基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代 噬菌体侵染大肠杆菌 2.1.2 DNA的结构与功能 主要成分 1、核酸 ( DNA 、RNA ) 2、蛋白( 组蛋白、非组蛋白 ) 染色体DNA必须含有的三个特殊元件 自主复制序列（autonomously replication DNA sequence，ARS） 着丝粒（centromere，CEN） 端粒（telomere，TEL） DNA的一级结构与功能 DNA的二级结构与功能 DNA二级结构 DNA的三级结构与功能 DNA双螺旋进一步盘曲形成更加复杂的结构，超螺旋。 2m长的DNA存在于5μm的核内？ 2.1.3 RNA的结构与功能 信使RNA（messenger RNA，mRNA） 核糖体RNA（ribosomal RNA，rRNA） 转运RNA（transfer RNA，tRNA） mRNA 真核生物mRNA rRNA tRNA 2.1.4 核酸的理化性质及其应用 一般理化性质 DNA为白色纤维状固体 RNA为白色粉末状固体 多元酸 紫外吸收：260nm 热变性中光吸收达到最大吸收（完全变性）一半（双螺旋结构失去一半）时的温度称为DNA的熔点或熔解温度（Tm）。 变性DNA在适当条件下，两条互补链可重新恢复为天然的双螺旋结构，这种现象称为复性（renaturation）。 DNA单链之间、一条DNA和一条RNA链之间主要存在序列互补配对区域，不管是整条链互补，还是部分序列互补，均可能重新形成整条双链或部分双链，这即为核酸分子杂交（hybridization）。 2.2 基因与基因组 基因（gene）：存在于DNA上承载遗传信息的核苷酸序列。 基因组（genome）：单倍体细胞中的全套染色体上所有基因的总和。 启动子（promoter）：一段能直接与RNA聚合酶及其转录因子结合、决定基因转录起始与否的DNA序列，一般位于基因转录起点上游100bp-200bp范围内。 真核生物的结构基因不仅在两侧有非编码区，而且在基因内部也有许多不编码蛋白质的间隔序列，即内含子（intron），编码区则成为外显子（exon）。 终止子（terminator）基因结构中能够促进转录终止的DNA序列，在RNA水平上通过转录出的终止子序列形成茎环结构而终止。 2.2.2 基因组 原核生物的基因组 基因组小 多顺反子mRNA 非编码区少 基因重叠 不含内含子 真核生物基因组 同源基因组 基因组大 单顺反子 重复序列 非编码序列90%以上 基因家族 转座子/逆转座子 单拷贝序列 中度重复序列 高度重复序列 基因家族 DNA甲基化 自私DNA 端粒 2.3 中心法则与基因表达调控 生物信息的传递 原核生物基因的表达调控 真核生物基因的表达调控 2.4 自然界的基因转移和重组 接合作用conjugation：细菌之间通过菌毛相互接触时，质粒便可从一个细胞转移至另一细胞，这种类型的DNA转移。 转化作用（transfromation） 通过自动获取或认为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。 转导作用（transduction） 当病毒从被感染的（供体）细胞释放出来再次感染另一（受体）细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组方式。 溶菌途径 溶原途径 转座（transposition） 由插入序列和转座子介导的基因移位或重排。 插入序列（insertion sequences，IS）：长750~1500bp的DNA片段，包括两侧9~41bp构成的两个反向重复序列和中央的一个转座酶编码基因，后者的表达产物可引起转座。 转座子（transposon，Tn）：可从染色体的一个位点转移至另一个位点的分散的DNA元件。 基因重组（recombination） 接合、