利用差异显示法研究刺参表皮再生相关基因-生物技术通报.PDF

生物技术通报 年第 期 ·研究报告· BIOTECHNOLOG Y BULLETIN 2008 6 利用差异显示法研究刺参表皮再生相关基因 陈秋实 李霞 段晶晶 周伯文 （大连水产学院 农业部海水增养殖学与生物技术重点开放实验室，大连 116023） 摘 要： 应用mRNA差异显示法对刺参（Apostichopus japonicus）正常表皮组织和手术后再生的表皮组织的基因 的差异表达进行了分析。利用经本实验室摸索改进的mRNA差异显示体系，获得了若干差异片段，将其测序结果在 GenBank数据库中比对发现，其中一个差异片段与CD151 基因具有较高的同源性，并且采用RT-PCR的方法对差异片 段进行了验证。进一步分析表明，该基因可能与表皮的再生密切相关。 关键词： 刺参 表皮再生 mRNA差异显示 Studies on Genes of Cuticle Regeneration Using Differential Display Method in Apostichopus japonicus （Key Laboratory of Mariculture and Biotechnology ，Agriculture Ministry ，Dalian Fisheries University ，Dalian 116023） Abstract - Apostichopus japonicus CD151 gene，and it was also provedbyRT- Key words 海参具有超强的再生能力，在自切排脏后，当环境条件适合时能很快再生出各种新的功能完善的内脏 器官。 研究海参的再生，不仅对水产养殖业具有重要的实践指导意义，而且为寻找及研制各种有应用价值 的促进再生的生物物质和设计更理想的促进再生的人工基质提供有价值的线索，为研究高等动物（尤其是 人类）的细胞分化、组织修复的确切机制和再生修复潜能的激发等相关问题奠定了理论基础。 另外，研究海 参的再生也为研究组织、器官的发生提供了一个独特的动物模型。 迄今为止， 国内有关海参再生的报道仅局限于关于海参具有再生能力的特征性描述， 对其再生的方 [1] 式、过程、机制等还未做过进一步的研究 。 国外学者对海参内脏器官和神经系统的再生以及海参被横切 [2~5] 后的再生进行了研究 ，研究方法主要涉及到了肉眼观察、组织切片观察和单克隆抗体等多种实验技术， 但分子水平上的研究明显落后于其它物种。 关于刺参再生机理的分子水平上的研究，国内外至今尚未见报 道。 仅就刺参表皮再生中的基因表达做以初步探讨，为进一步在分子水平上揭示其再生机制提供线索。 1 材料和方法 1.1 材料 实验所用刺参为 1~2 龄个体，体重为 60~90g ，体长（麻醉状态下）为 15~22cm 。 取自大连龙王塘海域， 为自然生长的个体。 刺参采回后在我院重点开放实验室水槽内暂养，饲养用水为砂滤海水，每天 4/5 换水 收稿日期： 2008-04-30 基金项目：国家自然科学基金资助项目），辽宁省自然科学基金资助项