血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳-赣南医学院.PDF

Gannan Medical University 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 赣南医学院 生物化学与分子生物学教研室 [ 目的] 1、掌握电泳基本原理及等电点的概念； 2、掌握醋酸纤维素薄膜电泳的基本操作技术，了解血 清蛋白质的组成。 [原理] 带电质点在电场中向其电性相反一极移动的现象 称为电泳。 蛋白质的等电点 （PI ）：蛋白质在某种溶液中所 带正负电荷量相等，这种溶液的pH值即此蛋白质的等 电点。 将蛋白质置于pH 比其等电点更高的缓冲液中，它 们将形成带负电荷的质点，在电场中均向正极移动。 电泳速度的影响因素： 电场力F＝qE；阻力f＝6πrην 当质点在电场中作稳定运动时：F＝F′即： qE＝6πrην 即：ν与q成正比，与r成反比。分子量小、带电 荷多的蛋白质移动速度较快；分子量大、带电荷 少的移动较慢。 样 处 点 γ球 蛋 白 球 蛋 β白 球 蛋 2白 α 球 蛋 1白 α 蛋 白 白 [步骤] 1、醋酸纤维素薄膜的准备。 取醋酸纤维素薄膜一张，在其毛面的一端 （负极侧） 1.5cm处，用铅笔轻划一横线作点样标记，编号，并 标明正、负极后将醋酸纤维素薄膜置于巴比妥- 巴比妥 钠缓冲液中浸泡，充分浸透 （20-30min ）后取出，夹 于滤纸中间轻轻吸去多余的缓冲液。 2、点样 用盖玻片 （或胶片）的截面均匀蘸取新鲜血清，在 醋酸纤维素薄膜毛面的点样标记处进行点样，注意点 样时血清不要蘸取过多，不可重复点样。 3、电泳 将醋酸纤维素薄膜毛面向下平直贴于电泳槽的支 架上，稳压80V ，电泳60min 。 4、染色 电泳完毕后，用镊子将醋酸纤维素薄膜取出，直接 浸入盛有氨基黑10B染色液的培养皿中，浸泡5min后， 取出，用自来水冲洗，再分别放入漂洗液1、漂洗液2 中漂洗数分钟，至背景无色后取出。