中药药物分析方法培训资料.ppt

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(i)峰高和峰面积 正常峰面积 : A=1.065Wh/2×h 不对称峰的面积可用平均峰宽来计算: A=1/2·(W0.15h + W0.85h) ×h 一般说来,当分离度小或流量波动 时,常用峰高定量。当峰形不正或色谱 柱超负荷时,用峰面积定量。 (ii)外标法 用与待测组分同质的标准品作对照品,以对照品的量对比求算试样含量的方法称为外标法。外标法是HPLC常用定量分析方法之一。分为外标工作曲线法和外标一点法 (iii)内标法 选择适宜的物质作为内标物,以待测组分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法称为内标法。内标法的关键是选择合适的内标物。内标法可以分为工作曲线法、内标一点法、内标二点法及校正因子法等。 (iiii)内加法 将待测组分i的纯品加至待测样品溶液中,测定增加纯品后的溶液比原样品溶液中i组分的峰面积增量,求算i组分的含量。 内加法定量分析计算公式如下: mi =(Ai /ΔAi)×Δmi 式中Δmi是纯物质i的加入量,ΔAi是相应增加的峰面积。 第七节 薄层扫描分析法 1、基本原理 薄层扫描法是指薄层色谱斑点的色谱扫描,薄层色谱扫描是指固定波长,斑点移动,测定A-l或F-l曲线。根据薄层扫描的测定方式分为薄层吸收扫描法和薄层荧光扫描法二种方法。 ①薄层吸收扫描法 光源:钨灯和氘灯; 灵敏度:在200-800nm波长范围内选择合适波长进行测定,其灵敏度可达ng级; 适用范围:适用于在可见、紫外区有吸收的物质,及通过色谱前或色谱后衍生成上述化合物的样品组分。 ②薄层荧光扫描法 光源:氙灯或汞灯。 灵敏度:最低可测到10-50pg。 适用范围:适合于本身具有荧光或经过适当处理后可产生荧光的物质的测定。 2、定量分析方法 ①方法学考察 ②常用的定量方法有外标法、内标法、追加法(叠加法)及回归曲线定量法。 外标法 外标法是薄层色谱扫描最常用的定量方法,方法简便,但点样必须准确。 A.外标一点法 工作曲线通过原点(截距为零)时可用外标一点法定量。 计算公式为: C=F1·A 式中:C为组分的重量或浓度,A为测得该组分的峰面积,F1为直线的斜率或比例常数。 6.原子吸收分析方法及应用 (1)原子吸收定量分析方法 校准曲线法 配制一组含有不同浓度被测元素的标准溶液,在与试样测定完全相同的条件下,按浓度由低到高的顺序测定吸光度值。绘制吸光度对浓度的校准曲线。测定试样的吸光度,从校准曲线上用内插法求出被测元素的含量。 A C Cx Ax O 标准加入法 分取几份相同量的被测试液,分别加入不同量的被测元素的标准溶液,其中一份不加被测元素的标准溶液,最后稀释至相同体积,使加入的标准溶液浓度为0,CS、2CS 、3CS… ,然后分别测定它们的吸光度,绘制吸光度对浓度的校准曲线,再将该曲线外推至与浓度轴相交。交点至坐标原点的距离Cx 即是被测元素经稀释后的浓度。 7、原子吸收干扰及其抑制 原子吸收光谱法的主要干扰有物理干扰、化学干扰、光谱干扰、电离干扰、和背景干扰等。 物理干扰(physical interference) 物理干扰是指试液与标准溶液 物理性质有差异而产生的干扰。如粘度、表面张力或溶液的密度等的变化,影响样品的雾化和气溶胶到达火焰传送等引起原子吸收强度的变化而引起的干扰。 消除办法:配制与被测试样组成相近的标准溶液或采用标准加入法。若试样溶液的浓度高,还可采用稀释法。 化学干扰(Chemical interference) 化学干扰是由于被测元素原子与共存组份发生化学反应生成稳定的化合物,影响被测元素的原子化,而引起的干扰。 电离是化学干扰的又一重要形式。原子失去一个或几个电子 后形成离子,不产生吸收,所以部分基态原子的电离会使

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