抗瘤胶囊抗小鼠实验性肝癌的研究.docVIP

抗瘤胶囊抗小鼠实验性肝癌的研究 　　（西南交通大学 药学院，四川 峨眉山 614202）?? 　　摘 要：目的：探讨抗瘤胶囊抗小鼠实验性肝癌的作用和机理，为进一步研究开发抗肝癌中药新药奠定良好的实验和理论基础。方法：抗瘤胶囊由仙鹤草、山豆根提取物按一定处方比例配比组成。建立小鼠肝癌（H22?）动物移植肿瘤模型，随机将小鼠分为正常组、模型组、阳性组、药物小、中、大剂量组并分别给药。实验结束后，进行抑瘤率、胸腺指数、脾指数、肿瘤组织病理等相关指标检测。结果：抗瘤胶囊各组对荷瘤小鼠的肿瘤生长有明显抑制作用，低、中、高剂量组的抑瘤率分别为32.11%、41.58%和45.26%，呈现良好的量效关系。病理学观察显示，模型组肿瘤细胞生长旺盛，而各用药组则出现不同程度的肿瘤细胞坏死，但各组胸腺指数和脾指数经统计学处理没有显著性差异。结论：抗瘤胶囊对小鼠肝癌（H22?）动物肝癌模型有明显的抑瘤作用，但在提高机体免疫功能方面的作用还有待进一步研究。? 　　关键词：抗瘤胶囊；肝癌（H22?）动物肿瘤模型；抑瘤率? 　　中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-2197（2008）10-0023-03?? 　　原发性肝癌(下称肝癌)为我国常见恶性肿瘤之一，其死亡率在消化系统恶性肿瘤中列第三位，仅次于胃癌和食管癌??［1］?。近年来，通过大量的临床及实验研究，中医中药对肝癌的疗效正日益受到人们的肯定和重视，其作用机理与直接杀伤或抑制肝癌细胞、保护和调节机体免疫功能、抑制癌前病变、破坏或抑制癌细胞遗传物质合成、诱导癌细胞凋亡及调控癌基因表达等因素有关??［2］?。? 　　本研究对2005年版《中国药典》收载的仙鹤草（Agrimonia pilosa Ledeb）和山豆根（Sophora tonkinensis Gagnep）进行研究，进一步了解其疗效和探讨其作用机制，并为研究开发抗肿瘤中药新药奠定良好的实验和理论基础。本研究采用小鼠肝癌（H22?）动物肿瘤模型，以抑瘤率、胸腺指数、脾指数和肿瘤组织的病理学观察为检测指标，探讨抗瘤胶囊抗肝癌作用及其相关机理。? 　　 　　1 材料? 　　 　　1.1 动物? 　　昆明种封闭群一级小白鼠60只，雌雄各半，体重20±3g，乐山长征制药厂提供。? 　　1.2 瘤株? 　　小鼠移植性肝癌（H22?）瘤株：由四川大学华西医学中心免疫实验室提供。1.3 药物? 　　替加氟片：上海医药（集团）有限公司华联制药厂生产，批号：060601，用蒸馏水配成8.33mg/mL的实验用液，密封置4℃冰箱中冷藏备用。? 　　抗瘤胶囊：乙醇浸提仙鹤草，加热回流提取山豆根等药，提取后分别浓缩成1∶1浓缩液，然后按一定处方比例进行适当配比。仙鹤草、山豆根均购于成都荷花池药材市场，经西南交通大学药学院宋良科副教授鉴定。? 　　 　　2 方法? 　　 　　2.1 肝癌动物模型建立及分组? 　　无菌操作，取荷肝癌（H22?）小鼠腹水，用0.9%的生理盐水稀释到含瘤细胞1×107/mL，每只鼠左腋皮下接种0.2mL，并将接种过的小鼠随机分为荷瘤模型组、阳性对照组、药物小剂量组、中剂量组、大剂量组，另设未接种瘤细胞的正常组共6组，每组10只，雌雄各半。? 　　2.2 用药方法? 　　小鼠接种瘤细胞24h后开始给药。正常对照组和模型对照组每天灌服纯净水0.5mL/只；阳性对照组每天灌胃替加氟片溶液（8.33mg/mL）0.5mL/只；三个抗瘤胶囊治疗组灌胃不同剂量实验用药，皆为每天0.5mL/只，qd，连续给药10d。? 　　2.3 标本的采集、制备? 　　停药次日，处死小鼠，解剖并完整剥离肿瘤组织，用电子天平称瘤重计算抑瘤率，并将肿瘤组织浸泡在10%甲醛溶液中，进行石蜡包埋、切片、HE染色，以作显微镜下病理学观察。同时胸腺和脾脏进行解剖后称重，以计算各组的胸腺指数和脾指数。? 　　2.4 检测指标? 　　2.4.1 抑瘤率测定? 　　计算方法：抑瘤率（%）=（1-T/C）×100%（T/C：治疗组平均瘤重/对照组平均瘤重）? 　　2.4.2 胸腺指数及脾指数的测定? 　　胸腺指数=胸腺重量（mg）/体重（g）；脾指数=脾重（mg）/体重（g）? 　　2.4.3 肿瘤组织病理学检查? 　　采用石蜡切片法。病理标本固定后，进行取材、脱水、浸蜡、包埋、切片和染色。? 　　2.5 统计? 　　将各组数据进行方差分析后采用t检验，检验方法采用SPSS13.0统计软件计算。? 　　 　　3 结果? 　　 　　3.1 对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用? 　　见表1。? 　　表1 对肿瘤生长的抑制作用? 　　 　　注：与模型对照组相比：△△示P0.01? 　　表1表明