多孔聚GMA-AM-EGDMA的制备及其对小麦酯酶的固定化研究-物理化学专业论文.docxVIP

I I 摘 要 摘要 取一定量的小麦面粉与磷酸缓冲液混合，用组织捣碎匀浆机搅拌混匀后于 4℃下静 置过夜。将溶液进行离心收集上清液，之后将上清液在冰浴下进行两次硫酸铵沉淀：加 入一定量的硫酸铵粉末（饱和度为 30%）并完全溶解后，于 4℃条件下静置半小时，使 其沉淀完全后离心，弃沉淀，将新得到的上清液中继续加入固体硫酸铵粉末，使其达到 一定饱和度（饱和度为 70%），再于 4℃条件下静置半小时后离心，弃上清，将得到的 沉淀用缓冲溶液溶解后在磷酸缓冲溶液中透析 2 天，得到粗酶液。取一定量的粗酶液， 通过实验确定小麦酯酶酶活力测定的最佳条件，测定了小麦酯酶的动力学性质，如：最 适温度、最适 pH 值、酸碱稳定性、热稳定性等。实验结果表明：小麦酯酶在 40℃时， 保温 8h，自由酶的酶活力为原来的 80.26%，在 50℃时，保温 8h，自由酶的酶活力为原 来的 68.67%，在 60℃时，保温 8h，自由酶的酶活力为原来的 10.05%。 以甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)和丙烯酰胺(AM)为单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯 (EGDMA)为交联剂，甲醇和水为液体致孔剂，纳米碳酸钙为固体致孔剂，偶氮二异丁 腈(AIBN)为引发剂，采用双油相悬浮聚合法（分别使用单纯液相制孔和固液联合制孔） 制备了多孔 GMA-AM-EGDMA 交联微球，摸索了载体制备的 GMA-AM 的用量比值、 交联剂 EGDMA 的用量、纳米碳酸钙的用量等。在对载体进行最优化处理的前提下，实 现了自提取小麦酯酶在此载体上的固定化过程，摸索了载体固定化酶的最适时间、最适 温度、酶液的最适浓度以及最适 pH 值。测定了固定化酶的动力学性质：固定化酶酶促 反应的最适温度、最适 pH 值、固定化酶的酸碱稳定性、热稳定性以及操作稳定性等。 单纯液相制孔和固液联合制孔所得载体固定化小麦酯酶实验结果表明：两种方法所得的 固定化酶酸碱稳定性、热稳定性等均优于自由酶，均具有良好的操作稳定性，但固液联 合致孔法制备的 GMA-AM-EGDMA 共聚物载体具有更大的比表面积，更高的固定化酶 活性，更好的固定化效果，因而具有更加广泛的应用前景。 关键词 甲基丙烯酸缩水甘油酯 丙烯酰胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 小麦酯酶 固定化 纳米碳酸钙 Abstract Abstract A certain amount of wheat flour was mixed with phosphate buffer solution and stirred evenly with high organization homogenate machine, after placing overnight at 4℃, the supernatant was collected by centrifugation method. The supernatant underwent the test twice of ammonium sulfate precipitation. For the first time, a certain amount of ammonium sulfate powder (saturation is 30%) was added and completely dissolved, after half an hour under 4℃, the liquid supernatantand was got after centrifugal separation. For the second time, the new obtained supernatant was added to reach a 70% ammonium sulfate saturation, after half an hour under 4℃, the precipitate was obtained by centrifugation and dissolved by phosphate buffer solution, after being dialyzed for 2 days in phosphate buffer solution, the wheat esterase enzyme solution was obtained and stored in the fridge to be used in the next step. Then the optimal conditions to determine the wheat esterase enzyme activity was fixed and the kinetic properties of wheat esteras