常用调料、饮料及雷丸对亚洲带绦虫囊尾蚴体外作用的实验研究-病原生物学专业论文.docxVIP

- - PAGE 10 - 常用调料、饮料及雷丸对亚洲带绦虫囊尾蚴 体外作用的实验研究 摘要： 专业：病原生物学 研究生：杜娟 导师：包怀恩 教授 目的：亚洲带绦虫是一种重要的食源性寄生虫，人感染原因是生食含有囊 尾蚴的猪肝或野猪等野生动物的内脏。本实验在前期工作的基础上，就以下几 方面展开了研究： 1、了解普通调料、饮料对亚洲带绦虫囊尾蚴存活的影响，有助于指导人们 改变不良的饮食习惯，以预防亚洲带绦虫病。 2、了解中药雷丸对亚洲带绦虫囊尾蚴体外作用后囊尾蚴的死亡率、一般组 织和超微结构形态变化以及细胞凋亡情况，初步探索中药雷丸对亚洲带绦虫囊 尾蚴的体外破坏作用。 3、比较中药雷丸与常规驱绦虫药物吡喹酮、阿苯达唑对亚洲带绦虫囊尾蚴 体外破坏作用的异同点，有助于进一步认识传统中药雷丸对囊尾蚴病的治疗作 用，同时为家畜体内囊尾蚴病的防治提供具有重要指导意义的基础资料。 方法： 1、从贵州省都匀市和独山县采集带绦虫成虫标本，在观察虫体一般形态学 的基础上，提取孕节 DNA，采用亚洲带绦虫线粒体细胞色素 C 氧化酶亚单位 1 （Cytochrome c oxidase subunit 1 ,cox1）基因片段的特异性引物对虫体 DNA 进行 PCR 扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳分析，以确定采集的虫体为亚洲带绦虫。 2、从亚洲带绦虫成虫孕节分离虫卵，虫卵经酶法孵育出六钩蚴，将活六钩 蚴按 5 000 个/只的感染量经皮下注射免疫抑制的昆明小鼠，感染后 58～62 d 剖 检小鼠，以获取大量成熟囊尾蚴。 3、常温下采用普通的调料及饮料对亚洲带绦虫囊尾蚴进行体外作用，并以 生理盐水作为对照组，观测不同作用时间各组囊尾蚴的死亡率，采用确切概率 计算法进行统计分析。 4、采用不同浓度的雷丸粉末体外作用于亚洲带绦虫囊尾蚴，以吡喹酮、阿 苯达唑作为阳性对照组，并设置生理盐水阴性对照组。作用不同时间后观测各 组囊尾蚴的死亡率，采用确切概率计算法进行统计分析；同时对囊尾蚴进行一 般形态学、组织学及超微结构观察；并用流式细胞仪检测各组囊尾蚴细胞凋亡 率，采用方差分析法进行统计分析。 结果： 1、采集的 5 条带绦虫呈乳白色，长 2.06～2.90 m，节片数为 627～873 节， 节片较薄，头节近方形，有 4 个吸盘，无顶突和小钩，成节卵巢分 2 叶，孕节 子宫每侧分支数为 18～24 支。5 条虫体提取的 DNA 经亚洲带绦虫 cox1 基因片 段的特异性引物 PCR，均扩增出 260 bp 的产物。根据一般形态学特征和分子生 物学鉴定结果，证实所采集的 4 条都匀绦虫和 1 条独山绦虫均为亚洲带绦虫。 2、六钩蚴感染免疫抑制小鼠 252 只，其中有 119 只小鼠被感染，感染率为 47.22 %，共获得囊尾蚴 1769 个。 3、白酒作用 1 min 后囊尾蚴死亡率达到 41.67 %，白酒、30 %食盐水作用 3 min 后囊尾蚴死亡率达到 75 %、91.67 %，食醋、蒜汁、10 %食盐水作用 5 min 后囊尾蚴死亡率达到 66.67 %、41.67 %、75 %，10%辣椒水作用 15 min 后囊尾 蚴死亡率达到 58.33 %，10%辣椒水、姜汁作用 25 min 后囊尾蚴死亡率达到 91.67 %、83.33 %，红酒作用 90 min 后囊尾蚴死亡率达到 41.67 %，以上各组与 对照组相比均具有统计学意义（P＜0.05）；不同调料饮料作用后囊尾蚴死亡率达 到 100 %的时间分别为：食醋 5 min、白酒 5 min、30 %食盐 5 min、10%食盐 10 min、酱油 15 min、姜汁 30 min、蒜汁 10 min、10%辣椒水 30 min、柠檬汁 40 min、 啤酒 90 min、红酒 120 min，与对照组相比均具有统计学意义（P＜0.05）；而鲜 橙多、营养快线、可乐作用 180 min 后囊尾蚴的死亡率 25 %、8.33 %、0 %，与 对照组相比均没有统计学意义（P＞0.05）。 4、(1)药物作用不同时间囊尾蚴死亡率测定：作用 6 h、8 h、42 h 后，阴 性对照组囊尾蚴的死亡率分别为 0 %、0 %、10 %，1 %雷丸组的死亡率分别为 0 %、0 %、6.67 %， 5 %雷丸组的死亡率分别为 0 %、3.33 %、13.33 %，上述 雷丸组死亡率与阴性对照组相比均没有统计学意义（P＞0.05）。20 %雷丸作用 6 h、8 h、42 h 后囊尾蚴死亡率分别为 3.33 %、36.67 %、70 %，与阴性对照组相 比，作用 6 h 后的死亡率没有统计学意义（P＞0.05），作用 18 h、42 h 后的死亡 率有统计学意义（P＜0.05）。1 %阿苯达唑作用 6 h、18 h