多层双聚合物修饰的稀土上转换发光纳米材料用于多模态成像及血清存在下提高转染效率的研究-影像医学与核医学专业论文.docxVIP

多层双聚合物修饰的稀土上转换发光纳米材料用于多模态成像及血清存在下提高转染效率的研究中文摘要 多层双聚合物修饰的稀土上转换发光纳米材料用于多模态成像及血清存在下提高转染效率的研究 中文摘要 多层双聚合物修饰的稀土上转换发光纳米材料用于多模 态成像及血清存在下提高转染的研究 中文摘要 第一部分 多层双聚合物修饰的稀土上转换发光纳米材料的制备及多模 态成像的研究 目的 探讨多层双聚合物修饰的稀土上转换发光纳米材料（UCNP-PEG@2×PEI）用 于磁共振成像（magnetic response imaging，MRI）及上转换发光成像(upconversion luminescence ,UCL)对比剂的可行性。 方法 1）制备 Gd3+掺杂的 UCNPs，分别采用高分子聚合物聚乙二醇 (polyethylene glycol, PEG)、聚乙烯亚胺 (polyethylenimine, PEI)、聚丙烯酸 (poly acrylic acid, PAA) 修饰, 形成 UCNP-PEG@2×PEI，并对其稳定性、表征进行研究。2)通过体外细胞毒 性试验（MTT）进行 UCNP-PEG@2×PEI 体外毒性的研究。3)将不同浓度梯度的 UCNP-PEG@2×PEI 与人宫颈癌（HeLa）细胞在体外培养 4 h，行磁共振 T1 序列的扫 描及上转换发光成像的多模态成像检测。 结果 1）透射电子显微镜显示，UCNP-PEG@2×PEI 是以 UCNP 为核心，外面修饰有 双层聚乙烯亚胺层。经过修饰以后，UCNP-PEG@2×PEI 在不同的生理溶液中具有较 好的稳定性；Zeta 电位及 Size 分布显示 UCNP-PEG@2×PEI 不仅带有较多正电荷而 且结构更紧凑；上转换发光荧光强度 显示修饰有两层聚乙烯亚胺层的 UCNP-PEG@2×PEI 上转换荧光强度仍然较高。 2 ）体外细胞毒性试验显示 UCNP-PEG@2×PEI 在较高浓度时未见明显细胞毒性。3）磁共振成像及上转换发光 成像显示 UCNP-PEG@2×PEI 具有较好的磁共振成像及上转换发光成像能力，且在一 定的浓度梯度内，随着 UCNP-PEG@2×PEI 浓度的增加，多模态成像的能力依次增强。 结论 UCNP-PEG@2×PEI 是一种修饰了两层聚乙烯亚胺层的稀土上转换发光纳米材 I PAGE PAGE IV III III 料，其在生理环境下具有较好的稳定性，并具有带有较多正电荷和粒径小的优点。体 外细胞毒性实验研究表明，UCNP-PEG@2×PEI 没有明显的生物毒性，同时具有较好 的多模态成像能力。因此, UCNP-PEG@2×PEI 可以作为一种新兴的 MRI 和 UCL 多模 态成像的纳米对比剂，用于肿瘤诊断。 [关键词] 稀土上转换发光纳米材料；多层双聚合物；表面修饰；多模态成像 第二部分 多层双聚合物修饰的稀土上转换发光纳米材料用于基因转染 的研究 目的 多层双聚合物修饰的稀土上转换发光纳米材料作为基因转染载体及血清存在条 件下提高转染效率的研究。 方法 1）用凝胶阻滞电泳实验分别判断 UCNP-PEG@2×PEI 与单纯 PEI 分别和质粒 DNA（plasmid DNA）的结合能力。将不同 N/P 比例 (1，2，5，10，20) 对应下的不 同浓度的 UCNP-PEG@2×PEI 和单纯 PEI 溶液与 1 ?g 质粒 DNA 混合，在室温下孵育 30 分钟后进行 0.8%凝胶阻滞电泳。2）体外无血清条件下增强型绿色荧光蛋白质粒 （EGFP plasmid）转染实验。在无血清存在的转染条件下,按照不同的 N/P 比例，将 UCNP-PEG@2×PEI 与单纯 PEI 分别和 EGFP 质粒孵育后转染 HeLa 细胞，转染效率 通过共聚焦显微镜及流式细胞仪分析。3）体外血清存在、固定 N/P 比例的条件下， 增强型绿色荧光蛋白质粒转染实验。在血清存在的转染条件下，固定 N/P 比例，将 UCNP-PEG@2×PEI 与单纯 PEI 分别和 EGFP 质粒孵育后转染 HeLa 细胞，转染结果 通过共聚焦显微镜及流式细胞仪分析。 结果 1) 当 N/P 比大于 5 时，凝胶电泳内可见 UCNP-PEG@2×PEI 与单纯 PEI 明显阻 滞质粒 DNA。2）在无血清存在的转染条件下，UCNP-PEG@2×PEI 和单纯 PEI 在 N/P 比 5 到 20 的条件下可以转染 HeLa 细胞, 且在相同 N/P 比的转染条件下， UCNP-PEG@2×PEI 的转染效率明显低于单纯 PEI。3）在血清存在、N/P 为 10 的转 染条件下， UCNP-PEG@2×PEI 和单纯 PEI 均可以转染 HeLa 细胞，且 UCNP-PEG@2×