对映-贝壳杉烷类二萜化合物抗肿瘤活性的研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

广州医科 广州医科大学硕士学位论文 中文摘要 万方数据 万方数据 对映-贝壳杉烷类二萜化合物抗肿瘤活性的研究 研究生： 杜际科 导师： 邹青峰教授 专业： 肿瘤学 摘要 天然产物是药物和药物先导化合物的重要来源。国内外已有很多研究证明，唇形 科香茶菜属对映-贝壳杉烷类二萜化合物具有广泛的生物活性，其中以抗肿瘤和抗炎 的作用最为显著。既往的研究表明，对映-贝壳杉烷类二萜化合物通过诱导细胞凋亡 和抑制细胞周期来发挥抗肿瘤作用。而具体的抗肿瘤作用机制和靶点还不明确。因 此为了能更好的评价其临床应用前景还需要更加深入和全面的研究。 本研究首先通过 MTT 分析法分析了 7 种对映-贝壳杉烷类化合物对鼻咽癌细胞株 增殖能力的影响，并计算出 IC50 值进行构效活性分析。这 7 种化合物均具有较好的 抗肿瘤活性。这可能由于它们具有一个相同的活性基团 α-亚甲基环戊酮结构。不同 位置的取代基又明显影响这类化合物的抗肿瘤活性。然后我们筛选出了一种对映-贝 壳杉烷类化合物（longikaurin A）研究其诱导鼻咽癌细胞株 CNE1、CNE2 凋亡的机 制。 针对 longikaurin A 这个化合物，我们进行 MTT 实验检测其增殖抑制的浓度-时间 效应。平板克隆形成实验分析其低浓度长时间干预是否同样抑制细胞增殖和细胞存 活。流式细胞学技术检测这个化合物诱导细胞凋亡和周期抑制。Western Blotting 法 检测线粒体依赖的细胞凋亡通路。建立裸鼠符合瘤模型，分析该化合物体内抗肿瘤 活性。 实验结果：这 7 种化合物均对鼻咽癌细胞株有不同程度的生长抑制作用。α-亚甲基 环戊酮结构是这类化合物共有的抗肿瘤活性基团，在抗肿瘤活性中起最主要的作用。 不同的取代基和不同位置的取代基均会影响这类化合物的抗肿瘤活性：C-1，C-11 位 的-OH 基会使这类化合物的细胞毒性减弱。C-11 位的-OAC 可使其活性增强。C-1 位 的-OH 被氧化成=O 基也可使这类化合物的细胞毒性增强。流式细胞学分析发现 longikaurin A 通过诱导细胞凋亡和周期抑制来抑制细胞增殖。Longikaurin A 可上调 促凋亡蛋白 Bax 和下调 Bcl-xL 的表达水平，Bax/Bcl-xl 的值也呈浓度依赖性升高。 1 这些可能促使线粒体膜电位(△Ψm)和 caspase 激活，最终导致 DAN 的裂解产生凋亡。 Caspase 广谱抑制剂 Z-VAD-FMK 可以完全阻断 longikaurin A 引起的细胞凋亡。另外 我们通过流式细胞仪发现低浓度的 longikaurin A 还可能会将肿瘤细胞阻滞在 S 期。 在裸鼠负荷瘤实验中，longikaurin A 可以显著的抑制肿瘤的生长，其效果并不亚于临 床常用化疗药物紫杉醇，而且并没有显示出更强的近期毒性反应。 综上所述，含 a-亚甲基环戊酮结构单元的对映-贝壳杉烷类二萜化合物均具有抗肿 瘤活性。a-亚甲基环戊酮结构是这类化合物的主要功能基团，不同的取代基和不同 位置的取代可改变其抗肿瘤活性。longikaurin A 可以通过激活线粒体途径引起细胞凋 亡。longikaurin A 还可以将细胞阻滞与 S 期，抑制值细胞增殖。Longikaurin A 具有良 好的体内抗肿瘤活性。 关键词：对映-贝壳杉烷类二萜化合物；Longikaurin A；细胞凋亡；鼻咽癌； 2 Study on the antitumor activity of the ent-kaurane diterpenoids Abstract Natural products is an important source for drugs and leading compounds of drug. Around the world many previous studies shown that the ent-kaurane diterpenoids had well biological activity, especially in anti-tumor and anti-inflammatory effect. However, the anti-tumor mechanisms and targets are still not clear now. Therefor further study need to be done. In this study, we analyzed the proliferation suppression of carcinoma cell lines for the seven compounds by MTT assay. Then we analyzed their s