茶树离体再生体系与微型嫁接的研究-遗传学专业论文.docxVIP

I I 摘要 茶树(Camellia sinensis)是世界上最重 要的生 产非酒精类饮料的 木本植物 之 一。它生长周期长，自然结实率和杂交结实率都较低，使得常规茶树育种需要 20-25 年[1]。植物组织培养技术是加快优质品种创新的重要手段，是现代生物技 术应用于遗传育种研究的基础。为建立快速、高效的茶树离体再生体系，本研究分 别以茶树平阳特早[C. sinensis cv.pingyangtezao] 7 月下旬枝条和茶树舒茶早[C. sinensis cv. shuchazao]10 月中旬的种子子叶为外植体，在离体培养条件下，首先建 立了茶树子叶离体再生体系，比较了其器官发生途径和体细胞胚发生途径；其次建立 了茶树腋芽离体快繁体系；第三采用微型嫁接的方式，解决了茶树组培苗生根难，耗 时长的问题，为茶树组织培养与工业化生产的连接提供技术参考。主要结论如下： 1. 茶树子叶离体再生的器官发生途径 不带胚子叶愈伤组织的诱导率随着 2,4-D 浓度的升高而增加，细胞分裂素配合生 长 素 使 用 对 愈 伤 组 织 的 产 生 有 增 效 作 用 。 在 培 养 基 MS + 2.0mg?L-1 2,4-D + 0.5mg?L-1 KT 中，岀愈时间最短，岀愈率最高，达 83.6%。转到芽诱导培养基 MS + 2.0mg?L-1 6-BA + 0.2mg?L-1 NAA 中继代培养，带胚子叶的出芽率、芽增殖倍数以及 体细胞胚发生率分别为 36.5%、12.3 和 38.2%，均高于不带胚子叶。 2. 茶树子叶离体再生的体细胞胚发生途径 在培养基 MS + 2.0mg?L-1 6-BA + 0.2mg?L-1 NAA + 1.0 mg?L-1 GA3 中，带胚子叶 和不带胚子叶可迅速脱分化产生胚性愈伤组织，进而产生体细胞胚和次级体细胞 胚，并萌发出芽。带胚子叶的体细胞胚发生率为 85.7%，体细胞胚萌发率 79.4%， 芽增殖倍数为 17.0，均高于不带胚子叶。 3. 茶树腋芽离体快繁体系的建立 以腋芽为外植体，在 MS + 2.0mg?L-1 6-BA + 0.2mg?L-1 NAA 培养基中腋芽迅速萌 发，培养 60d，成苗率可达 82.3%。将得到的小苗按枝条、去顶芽和部分叶片的枝条、 腋芽带茎和部分叶柄三种处理接种于 1/2MS + 1.0mg?L-1 6-BA + 0.1mg?L-1 NAA 培养 基中，腋芽带茎和部分叶柄的处理萌发率和增殖倍数最高，分别达到 71.4%和 5.5； 去顶芽和部分叶片的处理生长的最健壮；整个枝条的处理在部分茎段底端出现体细胞 胚。 4. 胚性愈伤组织的继代培养 继代培养中，体细胞胚的发生、萌发以及次级胚性愈伤组织的产生同时进行。 胚性愈伤组织的体细胞胚萌发率在 M（MS 不添加任何激素）培养基中最高，为 58.3%，在 P(MS + 2.0mg?L-16-BA + 0.2mg?L-1NAA + 1.0 mg?L-1 GA3)中最低；而次级 体细胞胚发生率以及体细胞胚增殖倍数在后者中最高。 I II 5．茶树体细胞胚的发生 茶树体细胞胚在子叶柄处直接发生，或在子叶处产生胚性愈伤组织间接发生。带 胚子叶以直接和间接两种方式产生体细胞胚，而不带胚子叶只以间接方式产生。 在体细胞胚间接发生途径中，子叶表面隆起是发生脱分化的标志，随后细胞团膨大、 颜色变绿转化成胚性愈伤组织，其表面长出半透明的颗粒状突起即为体细胞胚。体细 胞胚的石蜡切片表明，此处细胞小且排列紧密，细胞质浓，有若干个分生区域，具有 分生能力。 6．组培苗的微型嫁接 选取生长健壮的茶树组培苗，剪取 1.5-3cm 长作为接穗。茶树种子苗长至一 芽二叶，离基部 3-5cm 剪去嫩梢作为砧木。采用劈接法嫁接，将接穗切口处浸入 200mg?L-1 的 2,4-D 溶液中 3-5min，嫁接于砧木上胚轴处，用石蜡膜固定。20d 后 成活率为 64%。 关键词：茶树，子叶，腋芽，器官发生，体细胞胚，微型嫁接 PAGE PAGE III Abstract Tea(Camellia sinensis) is one of the most important woody plants which product non-alcoholic beverage drinks worldwide. It’s long growth cycle, low natural seed set and hybrid seed set make the need for conventional breeding and propagation 20-25 years. Plant tissue c