草莓抗枯萎病突变体的筛选及其抗性生理研究-植物病理学专业论文.docxVIP

摘 要 本研究建立了草莓离体叶片再生技术体系，以 5 个品种草莓组培苗为试材，应用 草莓枯萎病菌毒素作为选择压力，筛选草莓抗枯萎病突变体。并对突变体再生植株与 野生型植株的生长、分化、抗病性、抗性生理进行了研究。结果如下： 1. 以草莓叶片为外植体，明确了碳源、激素、AgNO3 对叶片愈伤组织诱导的影 响，建立了离体叶片再生体系。草莓叶片愈伤组织诱导的最佳条件为 MS +麦芽糖 30g/L + TDZ 3mg/L。适宜浓度的 BA 也能诱导出愈伤组织，但诱导出愈伤组织的质 量低于 TDZ 诱导。 2. 草莓枯萎病菌粗毒素对植株和茎尖生长点均有较强的毒害作用，经粗毒素处 理的植株能产生与枯萎病相似的症状。毒素浓度与茎尖枯死率呈正相关。粗毒素含量 10％为丰香、全明星、童子 1 号、达赛莱克特等草莓品种诱变的适宜选择压力；森格 纳草莓适宜选择压力为毒素含量 15％。 3. 在含毒素的培养基上继代培养可提高不定芽对毒素的抗性。在连续培养过程 中，5 个品种草莓不定芽存活率均有所提高。在含毒素的培养基上突变体不定芽分化 显著低于空白对照，但高于野生型不定芽对照。经毒素处理的突变体再生植株，其株 高、根长和干重等生长指标均高于野生型植株。抗病性鉴定结果表明，突变体再生植 株对枯萎病菌的抗性高于野生型再生植株。 4. 对筛选得到的 2 个突变体进行 RAPD 分析，发现有 2 个引物在 2 株突变体中 的扩增产物与野生型不同。 5. 用草莓枯萎病菌处理突变体和野生型再生植株，测定 6d 内不同基因型植株根 系内保护性酶活性的变化。测定结果表明，突变体再生植株根系内的保护性酶活力增 强，其中 SOD、CAT、POD 酶活性的变化趋势基本一致，即先升高后降低，且病原 菌处理的突变体植株酶活性始终高于病原菌处理的野生型植株。未经处理的突变体和 野生型植株 SOD、CAT、POD 酶活性没有明显变化。经病原菌处理后突变体和野生 型植株根系内 MDA 含量均呈上升趋势，突变体植株上升的幅度高于野生型植株。根 系活力随着病原菌处理时间的延长逐渐下降，并且经病原菌处理的突变体植株根系活 力始终高于病原菌处理的野生型植株。根系细胞膜透性变化趋势与根系活力相反，呈 上升趋势，且经病原菌处理的突变体植株细胞膜透性始终低于野生型植株。未经病原 菌处理的突变体和野生型植株根系内酶活性、MDA 含量、根系活力和细胞膜透性无 明显变化。 关键词： 草莓；枯萎病；毒素；突变体诱变及筛选；抗性生理；RAPD 分析 In vitro selection of mutants to wilt disease resistant and studies on their resistance mechanisms in strawberry Author: Liu Xue-jing Adviser: Prof. Zhen Wen-chao Specialty: Plant Pathology Abstract A co-cultivation technique system was developed for in vitro selection of mutants, in which crude toxins extracted from Fusarium oxysporum Schl. f.sp. fragariae were used as selection factor. The physiological and biochemical property of regenerated mutants and their parents were determined. The proper regeneration system of strawberry by leaf explants was established. The effects of carbon pressure, hormones and AgNO3 on callus regeneration from leaves of strawberry were investigated. The opyimal condition of callus regeneration is MS＋ maltose 20g/L+TDZ 3mg/L+ AgNO31 mg/L. The quality of callus induced by BA is worse than that induced by TDZ. The toxins had toxic sffects on plants and buds of strawberry. The toxins can caus