【生物技术】第七讲植物体细胞遗传学-(精选·公开·课件).pptVIP

体细胞无性系变异的诱导与选择 1 体细胞变异诱导材料的选择 1.3 合适的细胞类型 适当的细胞类型亦是提高体细胞突变系筛选效率的重要条件。 培养细胞的诱变 1 物理诱变 物理诱变主要是通过射线、磁场以及温度等对培养物进行一定处理，然后对处理后的培养物进行培养筛选。 常用的射线处理包括X射线、γ射线、快中子、紫外线等。 培养细胞的诱变 2 化学诱变 常用的化学诱变剂主要有：烷化剂（硫酸二乙酯 DES，乙基磺酸乙酯 EES，甲基黄酸乙酯 EMS，环氧乙烷EO，乙烯亚胺 EI等），此类诱变剂有一个或多个活化烷基，可与DNA分子中的碱基或磷酸基结合，改变DNA的结构而引起突变。 培养细胞的诱变 2 化学诱变 碱基类似物（5－溴尿嘧啶是胸腺嘧啶类似物，2－氨基嘌呤是腺嘌呤类似物等），在细胞内核酸复制时，这些类似物可以掺入到新合成的DNA分子中引起错配。 培养细胞的诱变 3 复合因子诱变 诱变处理可以是单因子处理，亦可以是复合因子诱变。一般来说，复合诱变的效果比单因子诱变好。 培养细胞的诱变 4 转座子插入诱变 可以独立插入通过其转座功能诱导变异。 利用这一途径已在苜蓿、马铃薯、番茄、甘蓝等多种植物上获得可利用的体细胞变异植株。 体细胞突变体的筛选 1 直接筛选法 直接筛选法是在设计的选择条件下，能使培养细胞或再生个体获得直接感官上的差异，因此能将突变个体和非突变个体分离。 最直接的做法是用一种含有特定物质的选择培养基，在此培养基上只有突变细胞能够生长，而非突变细胞不能生长，从而直接筛选出突变体。如抗除草剂、抗盐碱突变体的筛选，均可直接在培养基中加入一定浓度的除草剂或增加渗透压的物质。 体细胞突变体的筛选 2 间接筛选法 间接选择法是一种借助于与突变表现型有关的性状作为选择指标的筛选方法。当缺乏直接选择表型指标或直接选择条件对细胞生长不利时，可考虑采用间接筛选法。 体细胞突变体的筛选 如脯氨酸（Pro）作为一种渗透调节物质，在维持细胞膜稳定性、细胞水分平衡等方面具有重要的生物学意义。植物在非生物胁迫如干旱、低温等条件下，体内Pro常常有不同程度的升高，而且耐干旱和耐寒植物的体内Pro往往较高。 体细胞变异的利用 1 创造育种中间材料或直接筛选新品种 据统计，诱导突变已被用来改良诸如小麦、水稻、大麦、棉花、花生和菜豆这些种子繁殖的重要作物。在全世界50多个国家中，已培育出1000多个由直接突变获得的或由这些突变体杂交而衍生的品种。这些品种的主要特性包括品质改良、增强抗病性和抗逆性等。 体细胞变异的利用 2 遗传研究 突变体作为基因克隆和标记筛选具有独特的优点。因为突变一旦发生，即可在表现型上与供体显著不同，通过差异显示或分子杂交筛选，即可快速获得突变位点的DNA序列，经过测序与功能鉴定，就可能获得与突变性状相关的基因。 即使通过分析不能获得功能基因，这些DNA序列也可作为与突变性状相关的分子标记，用于相关遗传研究。 体细胞变异的利用 3 发育生物学研究 植物的个体发育是一个渐进过程，每一个器官和组织的分化都是一个复杂的调控过程。利用体细胞突变策略对植物发育的基因调控研究取得了突破性进展。特别是利用拟南芥和金鱼草等模式植物，已分离出一大批不同发育阶段和组织类型的突变体，包括顶端分生组织、根、开花转变、花序、花分生组织、胚胎发育等的一系列突变体。通过对这些突变体的研究，不仅建立了器官发育模式，而且分离鉴定了一大批与发育有关的基因，包括维持正常发育状态的基因、促进发育进程的基因，以及相关修饰基因（许智宏和刘春明，1998）。 体细胞变异的利用 4 生化代谢途径研究 生物的各种代谢活动涉及到一系列酶相关基因的表达。如果某一代谢过程的关键酶基因突变，则会影响到下游代谢链的正常进行。 因此，突变体作为代谢活动调控研究的工具，具有十分便利和高效的优势。 体细胞变异的利用 我们可以根据需要建立某一代谢途径中每一个调节点的突变体，也可以根据需要与基因工程相结合，对一些关键调控过程进行修饰和改造，使代谢过程按照人类需要进行，因此而发展起来的新型学科领域称之为代谢工程。 体细胞变异的利用 植物突变体用于代谢研究，早期最经典的例子是通过烟草突变体对硝酸还原酶的研究。