综合性试验蛋白质分离提取SDS.pptVIP

如图2所示，左侧为夹心垂直板电泳槽示意图，右侧为凝胶模示意图 * SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的精髓在于它的不连续体系，由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。 浓缩胶是由AP（过硫酸铵）催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。 分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。 电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。 2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。 * 通过三种效应，样品浓缩效应、分子筛效应及电荷效应完成样品分子的电泳和分离。其中样品浓缩效应由4个不连续性完成，包括凝胶孔径的不连续性，缓冲液体系离子成分及pH值的不连续性，电位梯度的不连续性。其中最复杂的是缓冲体系离子成分及pH值的不连续性，在浓缩胶部位形成了泳动速度不同的快离子即氯离子，慢离子是甘氨酸根离子，蛋白质分子则处于两者之间，因此蛋白质分子得到了压缩。在pH6.7的凝胶缓冲体系中 前导离子或快离子：HC1解离出的氯根(C1-) 尾随离子(trailing ion)或慢离子：甘氨酸根 mcl?clmp?pmG?G(Cl代表氯根，P代表蛋白质，G代表甘氨酸根)有效迁移率=m?，m为迁移率，?为解离度) 当进入pH8.9的分离胶时，甘氨酸解离度增加，其有效迁移率超过蛋白