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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 全细胞式记录 全细胞式记录的是全细胞膜面积的，而不是小片膜的离子电流。虽然吸管内膜片被吸破，但微吸管与细胞的封接有很高的电阻（一般＞10GΩ），这是保持全细胞式记录的重要条件。全细胞记录可以进行电压钳位和电流钳位，以测定膜电流和膜电位以观察细胞水平上离子通道的机能。微吸管内灌注生理溶液使单通道电流在正常离子环境中流动，也可以换为药物或毒素等非生理成分，研究药物对电压和递质依赖性通道的影响，对通道开关动力学的作用，达到从微观水平研究药物的作用机制。实验中也可任意改变膜片内、外溶液的浓度组分，研究各组分对膜通透性的影响。或根据实验的目的和为了特殊需要，可利用这一特点而通过充灌液与胞内液的交换而改变细胞内液成分。但要注意其中H+、Ca2+浓度要适宜，Ca2+浓度要低。全细胞式记录可进行1h以上。此外，也可用相应的激动剂作用于膜受体，在监测离子通道电流流动过程中，了解经过G蛋白介导的第二信使作用，研究跨膜信息传导的途径。 3) 膜片钳术的其它方面的运用 1.膜片钳术还可和钙图象技术联合应用测定单一活细胞内的[Ca2+]。 2.单细胞离子通道表达的体外扩增分析。 3.单细胞分泌活动的膜电容检测等。 4.脑片技术的应用，促进了对神经元以及中枢神经系统内神经元之间突触传递的电学特性研究。脑片技术应用到膜片钳记录之后更显示出它的优点。 三、离子电流的分离方法 虽然利用电压钳位方法能记录出冲动到来的离子电流，但是记录的是总的膜电流，即各种离子的总电流。如何把各种离子电流分离开呢？以便研究各种离子在动作电位期间离子电流的变化。有以下几种方法： 1. 离子置换法 2. 药理学方法 3. 逆向电位法  离子电流(Iion)是指单位时间内净通过膜的电荷；而通透性(P)是指膜对某种物质（包括离子）的通透能力；驱动力（Vm-Eion）则是指决定离子跨膜移动方向的力，用膜电位与离子平衡电位之差来表示；离子电导(gion )用离子移动时阻抗的倒数来表示，gion=1/Rion。 以上各量之间的关系可用下式来表示：Iion=gion（Vm-Eion），所以离子电流的大小和方向取决于驱动力。在电压钳实验中,若不断改变Vm，对Na+有以下三种情况： Vm Ena 内向Ina， Vm = Ena INa = 0， Vm Ena 外向INa 。 因此根据这个原理，在钳位条件下，可以不断改变Vm，使得初相电流（I=0）为零时的Vm值与ENa值进行比较，看离子电流移动方向，是外向还是内向。另一种办法是将膜电位调到等于某个离子的平衡电位时，如Vm=+52mV时，正好是Na+的平衡电位，即Vm=ENa，则INa=0，这样可以消除Na+的贡献，用记录到的总离子电流Iion减去消除Na+贡献后所得到的离子电流（即：I`ion，其中主要是IK），则可得到INa（Iion-I`ion=INa）。同样，可以消除K+的贡献，便可得到IK。 四、通道电流的分析 电压钳和膜片钳直接记录的是在一定条件下产生的内向或外向电流。在电生理学中，电流的方向以正离子流动的方向来命名。凡细胞外正离子跨膜向细胞内流动或细胞内负离子向细胞外流动，称为内向离子电流，它可使膜内电位向正电性转化，促使膜去极化；反之，凡是正离子外流或负离子内流，称为外向离子电流，引起膜发生复极化或超极化。 1．膜电流与膜电位的关系  利用通道的电流—电压关系可分析通道的整流特性和离子选择性。按照欧姆定律，通过某一导体（电阻，R）的电流（I）与导体两端的电压（V或E）成正比（I=V／R），为了更好地描述离子通道允许电流通过的能力，引进了电导（g）的概念，电导就是电阻的倒数（g=1/R），因而欧姆定律可改写为I=gE。若以膜电位为横轴，流经离子通道的电流为纵轴，则通过该通道的电流与电压的关系（Current voltage relationship，简称I-V关系或I-V曲线，见图14-5），理论上应为线性关系，其斜率即为该通道的电导。 从图中可见电流为零的电位（因为电流在此电位改变方向或符号，故又称为反转电位，reversa1 potential，Erev）是与离子的平衡电位相等的膜电位并不是在0mV处。实际上，许多通道具有非线性的I-V关系，尤其在可通透的离子在膜两侧的浓度不同或通道结构不对称