第五章 离子交换层析20170321.pptVIP

（二）离子交换柱长度的影响 离子交换柱的长短对蛋白质的分离影响不是很明显，如一支柱床高度为25cm和5cm的离子交换柱对蛋白质的分离没有多大差异。因此，离子交换柱一般都选用短粗的层析柱，柱长容易造成分子筛效应，使保留值延长，引起洗脱峰的扩散，出现重叠现象。使用短柱优点是洗脱体积相对比较集中，相应的浓度比较高，容易提高检测灵敏度，柱的负载少，操作压小，有利于提高流速。（三）缓冲溶液的影响 缓冲溶液的影响包括溶液的pH值、缓冲容量、离子强度等因素。 57 1．pH值影响 对弱电解质和两性解离的生物大分子，在离子交换层析分离技术是通过调节缓冲液的pH值来控制样品的解离度或所带电荷的性质及净电荷量。例如在分离蛋白质时，缓冲液的pH值高于蛋白质的PI带负电荷；低于蛋白质的PI带正电荷。所以缓冲液的pH值可以决定蛋白质带什么样的电荷，决定选择什么样的离子交换介质。如果缓冲液的pH值选择不当，将会给整个分离系统带来负面效应，如吸附率差、回收率低、杂质多等。 58 2．缓冲容量的影响 缓冲容量主要是对溶液的pH起平衡作用，在离子交换层析过程中使溶液的pH值保持稳定。某些蛋白质在分离过程中解离度发生变化，当缓冲溶液的缓冲容量不能缓冲样品引起的pH值变化时，溶液的pH值发生漂移，导致解离度发生变化，从而影响溶质的交换量。 59 3．缓冲液浓度的影响 离子强度增加，离子与被分离物的