(农业大学)生物化学.pptVIP

* （3）凝胶过滤的原理 由于被分离物质的分子大小（直径）和形状不同，洗脱时，大分子物质由于直径大于凝胶网孔不能进入凝胶内部，只能沿着凝胶颗粒间的孔隙，随溶剂向下移动，因此流程短，首先流出层析柱，而小分子物质，由于直径小于凝胶网孔，能自由进出胶粒网孔，使之洗脱时流程增长，移动速度慢而后流出层析柱。 * （二）利用溶解度差别的纯化方法 1、等电点沉淀 不同的蛋白质具有不同的等电点，利用蛋白质在等电点时溶解度最低的原理，可以把蛋白质混合物分开。 等电点沉淀的蛋白质保持着天然构象。 * 2、盐析和盐溶 （1）盐溶 盐溶（salting in） ：在蛋白质溶液中加入中性盐时，在盐浓度很稀的范围内，随着盐浓度增加，蛋白质的溶解度增加。 原因：蛋白质分子吸附某种盐类离子后，带电层使蛋白质分子彼此排斥，蛋白质分子与水分子间的相互作用加强。 * （2）盐析 ①定义： 当离子强度增加到足够高时，例如饱和或半饱和的程度，很多蛋白质可以从水溶液中沉淀出来，这种现象叫盐析 ②原因：破坏胶体颗粒的水化层，使疏水基团暴露，由于疏水作用蛋白质聚集而沉淀。 ③最常用的中性盐：（NH4）2SO4。 * 3、有机溶剂分级分离法 在一定温度、pH和离子强度条件下，引起蛋白质沉淀的有机溶剂的浓度不同，控制有机溶剂浓度可以分离纯化蛋白质。 * （三）根据电荷不同的纯化方法 1、电泳（electrop