25.移植免疫与检测1.pptVIP

HLA Class I HLA-I类分子是由α，β双链构成的异源二聚体，其中α链由HLA-A,B,C基因座位编码，β链又被成为β2微球蛋白，由15号染色体编码，β2微球蛋白具有保守性。可广泛地表达于各种组织的有核细胞上，以LC表面的表达密度最高（105分子/细胞），成熟的RBC，神经细胞及滋养层细胞则不表达。HLA-I类抗原的主要生物学作用是向CD8＋Tc递呈内源性抗原，产生细胞免疫。 HLA Class II 为什么要做HLA分型? HLA 的遗传特征： 高度多态性： 1. 复等位基因：指在一随机婚配的群体中，染色体的同一基 因座位有两种以上基因型，即可能编码两种以上的产物。 2. 共显性：来自父亲和母亲的一对等位基因均能转录、翻译成HLA分子，共同表达于细胞膜上。一方面增加其抗原递呈能力，利于保护自身，另一方面也增加了表型的多样性，造成其细胞膜表面抗原的复杂性。 3. HLA系统是已知人类基因序列中多态性最多的。 HLA多态性是不同个体间组织不相容的分子基础。 单倍型遗传： 单倍型：紧密连锁在同一染色体上的HLA各座位上的基因组合。 单倍型遗传：单倍型之间发生同源重组的机率很低，常以一整套遗传给子代。 HLA多态性基因的随机组合造成不同个体间获得HLA 完全匹配的机率极低，但是由于单倍型的整体遗传， 使得不同个体间获得HLA主要位点匹配成为可能。 HLA与疾病的关系 1.HLA与疾病的相关性： 某些疾病的发生与一种或几种HLA抗原的表达具有直接或间接相关性，因此HLA作为一种疾病发生的遗传标志可用于疾病的辅助诊断、预测、分类及预后判断,如病毒的易感性,I型糖尿病的发病,疫苗的效果相关。 什么是HLA分型和如何进行HLA typing ？ B.等位基因型：核苷酸序列特异性； HLA Typing 1. 血清学分型/Serological typing 2. 细胞学分型/Cellular typing 3. 分子生物学分型 /Gene typing  血清学分型实验流程 1.收集标本，密度梯度离心法 分离白细胞/淋巴细胞 2.加约2,000个外周血细胞于已经预先加有不同类型抗血清的反应板中，混匀后在20-25c.下温育30 分钟 3. 每孔加5微升5补体，继续 于20-25c 温育60分钟 4.每孔加5％伊红水溶液3微升，孵育5分钟后加固定液－12％甲醛5微升 5.观察结果 血清学分型结果判定 结果判定分为两步： 1.首先通过镜检，给每一种特异性抗血清反应结果打分。根据每孔中死细胞的百分率打分，分为五个等级：强阳性；阳性；阳性可疑；阴性可疑；阴性。 2. 根据打分结果，首先选出强阳性反应抗血清类型，再根据多数原则指定抗原 特异性。 记分表 血清学分型主要影响因素： 细胞学分型 细胞分型的特点 1. 用于分型鉴定的标准细胞株的来源和保存都比较困难，而且混合淋巴细胞培养实验本身操作繁琐耗时，使其难以广泛推广，目前正逐渐被基因分型方法所取代。 基因分型 1. 基因分型是根据不同等位基因之间DNA序列的差异判断个体间的HLA基因型，与前两种方法相比，基因分型法并不要求活的淋巴细胞，任何组织来源的含基因组DNA的细胞均可用来做HLA分型。 SSP/RFLP SSOP 基因分型 各种基因分型方法比较 抗原法/基因法 HLA Typing 的命名和结果的标准化 HLA字典 2008 WHO 1. 在等位基因名称中引入冒号； 如： A A*01:01:01:01 DRB1 DRB1*01:01:01:01 2.在等位基因数目已经超过100的基因中，采用新的编码方法： 如： A*02和B*15组，原来用A*92和B*95表示100个以后的等位基因，现重新改 回 A*9201→ A*02:101 B*9501 → B*15:101 3.HLA-C的等位基因名称中不再保留“W”, 抗原名称中仍保留； 如：Cw*0103 C*01:03 Cw*020201 C*02:02:01 www.ebi.ac.uk/imgt/hla MHC and HLA 血清学分型和等位基因分型的特点和原理 字母HLA代表染色体上一段特殊的遗传区域（人类白细胞表面抗原区域）；