恩度(Endostar)对氧致鼠视网膜血管增殖性病变治疗作用的实验研究-中西医结合;临床眼科学专业论文.docxVIP

前言 视网膜血管增殖性病变是诸多眼部疾病后期的严重并发症，如早产儿视网 膜病变（Retinopathy of prematurity. ROP），糖尿病视网膜病变、视网膜中 央/分支静脉阻塞等。因视网膜血管增殖产生的新生血管缺乏正常的组织结构， 其产生后即可导致渗出，出血，增殖等损害，严重危害患者视力。虽然可导致 RNV 产生的疾病种类多样，但共同性的病理基础即是由于各种原因导致局部组织 的缺血缺氧。 早产儿视网膜病变（ROP）是发生在早产儿或低体重儿的致盲性眼病，是 引起婴幼儿视力丧失的首要原因之一。ROP 的病理变化特征之一即是视网膜缺 血缺氧导致视网膜新生血管的产生，因此早产儿视网膜病变动物模型常被用作视 网膜新生血管机制及治疗的研究。通过高氧诱导新生鼠致早产儿视网膜血管增殖 性病变模型的方法较简单，建模周期短，成膜率高而倍受研究者厚爱。而如何有 效使用现成的简单医疗或研究器具，使建模方法更简单、经济、实用，效果确切 是大多研究者的共同心愿，本研究的目的之一即是通过使用简单器具，用极简易 的方法建立 RNV 动物模型，以使该建模方法更加适用。 现今临床对于上述可致盲性眼病尚无理想的治疗手段或方法。血管内皮抑 素是一类能有效抑制血管内皮细胞增殖，抑制新生血管产生的药物，目前临床主 要用于抗肿瘤治疗。而恩度作为一种重组血管内皮抑素制剂，具有疗效强，稳定 性高，体内代谢时间长，价格较低，无耐药性，低毒性等优点。若能将其应用于 眼部新生血管性疾病，将能提高无数患者的生命质量。 本实验将通过建立高氧诱导早产儿视网膜病变模型的方法建立视网膜血 管增殖性病变模型，并通过给予一定剂量的恩度，观察恩度对视网膜新生血管的 抑制作用及视网膜病变机制。 实验材料 1、 建立动物模型材料 小鼠笼盖（饲料饮水盖 我院动物实验室提供）；硬塑料整理箱(底面长 45CM ×宽 35CM×高 30CM 购自超市)；无菌鼻吸氧管（四川省人民医院眼科病房提供）； 硬质木板、钻孔机（四川省人民医院木工房提供）；便携式测氧仪（成都贝斯达 仪器有限公司）；医用纯氧气罐（我院高压氧气站提供）；医用大塑料垃圾袋、鼠 垫料、鼠饲料、饮水瓶（我院动物实验室提供）；宽胶布（市购）； 新生 7D 龄 SD 大鼠（新生鼠 3 窝 共 30 只 母乳鼠 4 只），普通级，购自四 川省人民医院动物实验楼。实验期间饲养于四川省人民医院动物实验中心。 饲料：母乳鼠食用饲料由四川省人民医院动物房代购，营养成分符合普通级 SD 大鼠饲养条件。 饮水：生活饮用水 生活环境：室温 23±2℃，湿度 50%-70%。光照：日光灯照射 12h/天。 2、实验材料与仪器 4%多聚甲醛液、4%水合氯醛液、荧光显微镜（zeiss）、1ml注射器、PBS液、 NaOH、浓盐酸、无菌注射用水、恒温水浴箱、溶液PH检测仪、恩度原液（购自山 东先声麦得津生物制药有限公司，国药准字：；Fitc-dextran(sigma 分装) 50mg/ml；组织切片HE染色试剂；大鼠血清ELASA试剂盒； 免疫组化材料：一抗（I抗PEDF，250819 兔抗大鼠IgG, 北京中山金桥有限 公司；I抗VEGF, BS-L1313兔抗大鼠IgG,BA2142北京博奥森）；II抗/III抗:SP9000 （通用型）-Plus kits 北京中山金桥有限公司；显色剂DAB：DAB-0031 福州迈 新生物技术有限公司 实验方法 1、 实验分组与建模 将厚约 1cm 的硬质木板加工成约 35 cm×30 cm 大小，并使用钻孔机将其钻 数个直径约 0.5 cm 的孔，插置于塑料整理箱中间，用螺丝钉将木板两侧与整理 箱一起固定，将整理箱空间分为左右室，木板中的孔洞可使两室气体流通均衡。 分别在整理箱左右室的同侧板距底约 5 cm 高度处开 2 孔，用以导入氧气，命名 为进 1 孔、进 2 孔，直径约 0.3 cm。在对侧板近盖板边缘处左、中、右共开 3 孔，用于排气和检测氧浓度，命名为出 1 孔、出 2 孔，测 1 孔，直径约 0.3 cm。 将解压阀安装于医用纯氧气罐上后，将导气管管口与鼻吸氧管粗接头相连接，并 用胶布固定密封，将吸氧管的鼻吸头剪断，分别插入进 1 孔、进 2 孔以输入纯氧 气，并用胶布密封固定孔周。出气孔保持开放。便携式测氧仪在正常空气中调节 至 21%～22%后，探头经测 1 孔插入，并用胶布固定密封孔周（图 1、2、3）。 模型组及实验组的新生乳鼠连同母鼠分别放入箱内木板两侧空间内，其下放 置厚约3cm干木屑，将小鼠笼盖卡于两侧箱内侧壁突起处至固定，并放入饲料及 饮水瓶。用不透气的塑料薄膜（可用医用大塑料垃圾袋）密封箱口，再盖上原整 理箱盖。在盖箱之前打开氧气罐开关，调节压力阀，使压力阀指针略偏