抑制剂去除对冷冻草莓中诺如病毒RT-PCR检测影响.PDFVIP

296 2017, Vol.38, No.04 食品科学 ※安全检测 抑制剂去除对冷冻草莓中诺如病毒RT-PCR 检测的影响 徐文斐，房保海，林 超，王宫璞，王 群，郑小龙，梁成珠，岳志芹* （山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，山东青岛 266002 ） 摘  要：目的：设计对比实验，以冷冻草莓为材料，研究样品中所含抑制剂对诺如病毒荧光定量逆转录聚合酶链 式反应（reverse transcription polymerase chain reaction ，RT-PCR ）检测结果的影响，优化提高检测灵敏度与准确 G RNA RNA 率。方法： Ⅱ型诺如病毒便悬液的制备与 提取，已知阴性冷冻草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒 提取纯化，分组（对照组、实验组），抑制剂去除，荧光定量RT-PCR检测。结果：随着病毒浓度的梯度递减，抑 制剂影响作用呈明显增强趋势，导致在高于正常检测最低限度两个数量级的水平，即出现假阴性结果；抑制剂去 除的实验组检测结果，随着病毒浓度梯度的递减明显优于未经处理的对照组；抑制剂去除的实验组稳定检出限为 10－6 Ct 40 10－7 norovirus NoV 10－5 （ 值小于 ），最低检出限为 （诺如病毒（ ， ）浓度梯度检测最低检出限为 ）。结 论：抑制剂去除可明显优化冷冻草莓中NoV 荧光定量RT-PCR检测，提高检测方法的灵敏度，且操作简便快捷，检 测成本浮动不大，期望应用于日常检测工作中。 关键词：冷冻草莓；诺如病毒；荧光定量RT-PCR ；抑制剂 Influence of PCR Inhibitor Removal on Detection of Norovirus G Ⅱ in Frozen Strawberry by Real-Time Fluorescent RT-PCR XU Wenfei, FANG Baohai, LIN Chao, WANG Gongpu, WANG Qun, ZHENG Xiaolong, LIANG Chengzhu, YUE Zhiqin* (Technique Center of Inspection and Quarantine, Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Qingdao 266002, China) Abstract: Objective: Comparative experiments were designed to address the influence of the presence of PCR inhibitor  on the results of detection of norovirus GⅡ in frozen strawberry by real-time fluorescent RT-PCR (RT-qPCR), aiming to  improve the detection sensitivity and accuracy. Methods: After pretreatment of fecal suspensions containing norovirus GⅡ  and known negative strawberry samples, the virus was enriched for the extract