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二氢杨梅素保护内皮细胞、抑制炎症反应的抗动脉粥样硬化作用及机制研究-中西医结合药理学专业论文
独创性声明
本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作 及取得的研究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做 出贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声 明的法律结果由本人承担。
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摘 要
心血管疾病是一种严重危害人类健康的疾病,其中,动脉粥样硬化已经成为西方 发达国家引起死亡的主要病因,其发病率和病死率均为各项疾病之首,在中国的发病 率和死亡率亦逐年上升。在他汀等一线抗动脉粥样硬化治疗药物存在一些不良反应, 应用受到一定限制的情况下,从天然植物或中草药中挖掘能够阻滞、延缓动脉粥样硬 化病变进程的药物,对动脉粥样硬化的防治工作具有非常重要的科学意义和社会价值。
二氢杨梅素是一种二氢黄酮醇类黄酮化合物,广泛存在于葡萄科蛇葡萄属植物中, 在中药藤茶的原植物显齿蛇葡萄幼嫩茎叶中含量可达 30%。《中华本草》记载,藤茶有 “清热利湿,平肝降压,活血通络”的功效。既往研究发现,二氢杨梅素具有抗氧化、抗 炎、抗肿瘤、降血压、抑制体内血栓形成、降糖、保肝和防止病原微生物等药理活性, 然而关于其预防和治疗动脉粥样硬化的功效机制尚无报道。
本研究从动脉粥样硬化目前公认的两个主要的病因学说出发,考察二氢杨梅素对 动脉粥样硬化病变过程中内皮细胞损伤的保护作用以及对炎症反应的影响,并探究其 可能的作用机制。同时,采用网络药理学的分析方法,对二氢杨梅素在动脉粥样硬化以 及其他一些疾病中的蛋白靶点进行预测和分析。
第一章 二氢杨梅素对过氧化氢诱导的内皮细胞损伤的保护作用研究 目的:体外考察二氢杨梅素对过氧化氢诱导的内皮细胞损伤的保护作用。 方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,用过氧化氢诱导建立氧化损伤模型,检测二氢杨梅 素对内皮细胞活力的影响;用不同浓度的二氢杨梅素干预,检测抗氧化酶 SOD 以及过 氧化产物 MDA 含量的变化;通过流式细胞术检测二氢杨梅素对过氧化氢引起的细胞 凋亡的影响,并用 Hoechst33342 染色确认结果;用荧光显微镜观察细胞 ROS 释放的变 化;用试剂盒检测 NO 的释放情况。
结果:在 0 到 300 μM 的浓度范围内,二氢杨梅素能够增加内皮细胞的活性,能够有效 减少过氧化氢诱导的 HUVECs 的 MDA 的产生,但对 SOD 的活性无明显影响。流式细
胞实验结果说明,二氢杨梅素能够剂量依赖性的降低过氧化氢诱导的 HUVECs 细胞的
凋亡比率,发挥细胞保护作用。Hoechst3334 染色实验发现,经二氢杨梅素预处理后, 过氧化氢引起的细胞凋亡逐渐减少。荧光显微镜检测 ROS 的释放结果说明,二氢杨梅 素能够减少过氧化氢诱导的内皮细胞 ROS 的过量产生。另外,在过氧化氢诱导的内皮 细胞损伤模型中,二氢杨梅素预处理 2 h 能够明显增加受损伤内皮细胞 NO 的释放量。 结论:二氢杨梅素能够减少过氧化氢诱导的内皮细胞损伤或凋亡,提示二氢杨梅素可 从阻滞动脉粥样硬化的起始环节-内皮细胞的损伤来预防或延缓动脉粥样硬化的病变 进程。
第二章 二氢杨梅素对过氧化氢诱导的内皮细胞损伤的保护机制研究 目的:探讨二氢杨梅素产生内皮细胞保护作用可能的机制。 方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,用过氧化氢诱导建立氧化损伤模型,用不同浓度的 二氢杨梅素预处理,检测二氢杨梅素对凋亡信号通路 Bax、Bcl-2、p53、p-p53、cytochrome c、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、PARP 和 cleaved PARP 等信号分子的影响。 结果:二氢杨梅素能够通过抑制过氧化氢诱导的 p53 的激活,之后增加 Bcl-2 的表达, 减少 Bax 的表达,进而抑制线粒体 cytochrome c 的释放,抑制 caspase-3 的激活,减少 PARP 的裂解,发挥内皮细胞保护作用。 结论:二氢杨梅素的内皮细胞保护作用,可通过抑制过氧化氢诱导的线粒体凋亡信号 通路来实现。
第三章 二氢杨梅素体内外抗炎作用研究
目的:体内外实验考察二氢杨梅素的抗炎作用。
方法:建立 LPS 诱导的
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