二氢青蒿素对抑制人尿道瘢痕成纤维细胞增殖的实验研究-外科学专业论文.docxVIP

摘 要 摘 要 目的： 尿道损伤及尿道手术后尿道狭窄发生率较高。至今，临床上尚无切实有效的方法治 疗尿道狭窄，始终不能摆脱狭窄-扩张/手术-再狭窄的诊治怪圈，给患者带来极大的痛苦。 尿道瘢痕组织是尿道创伤修复过程的产物，没有瘢痕就不会有创面的愈合。但是瘢痕一 旦过度生长，就会产生尿道狭窄。目前研究发现：狭窄的尿道组织存在典型的瘢痕过度 增生改变。但对引起尿道瘢痕过度增生的影响因素不是很明确，因而缺乏有效的措施阻 止尿道狭窄的发生。在对皮肤创面瘢痕形成的研究中发现：创面愈合过程中成纤维细胞 表现出强烈的增殖能力以及胶原大量分泌、沉积，所以认为成纤维细胞过度表达及胶原 的异常分泌是瘢痕产生的根本原因。成纤维细胞是最主要的修复细胞。青蒿素是我国有 自主知识产权的药物，我国正对该药进行大力开发和研究。近年发现青蒿素有较好的抑 制瘢痕成纤维细胞增殖作用。本课题旨在通过对二氢青蒿素干预后抑制人尿道瘢痕成纤 维细胞增殖的研究，以揭示二氢青蒿素抑制人尿道瘢痕成纤维细胞增殖的机制，为人尿 道瘢痕防治开辟新路，为临床预防和治疗尿道瘢痕狭窄提供理论依据。 方法： .采用组织块贴壁法进行尿道瘢痕成纤维细胞的原代培养，使用含 10%胎牛血清的 RPMI-1640 培养基，37℃，5%CO2，饱和湿度下培养；描述其生长曲线、分裂指数、形 态及波形蛋白表达。 2.采用 MTT 法测定二氢青蒿素对尿道瘢痕成纤维细胞的 IC50,采用 TUNEL 法检测 二氢青蒿素作用后尿道瘢痕成纤维细胞凋亡情况，同时采用比色法测定 caspase-3、8 和 9 在二氢青蒿素作用后的活化情况，以判断二氢青蒿素作用后是否导致尿道瘢痕成纤维 细胞中的 caspase 活化，并了解是通过哪条通路促进凋亡。 结果： 1.尿道瘢痕成纤维细胞培养成功率 75%（6/8）；50～66 天可传第一代，以后每 5～ 10 天可传一代，传代后生长良好；细胞为长梭形，波形蛋白表达阳性。 .二氢青蒿素对尿道瘢痕成纤维细胞的 IC50 为 145μmol/L。通过 TUNEL 法检测到 145μmol/L 二氢青蒿素作用于尿道瘢痕成纤维细胞后可以见到明显的凋亡细胞。通过比 I 摘 要 色法检测到 caspase-9 和 caspase-3 活化，而 caspase-8 没有活化。 结论： 1.组织块贴必法培养出的尿道瘢痕成纤维细胞可用作体外实验研究，并为进一步实 验提供了物质基础。 2.一定浓度的二氢青蒿素能够促进尿道瘢痕成纤维细胞凋亡，并通过活化 caspase-9 后，再活化 caspase-3，而启动凋亡程序。 关键词 尿道瘢痕 成纤维细胞 二氢青蒿素 MTT 法 TUNEL 法 细胞凋亡 Abstract Abstract Objectives: The incidence of urethral stricture post urethroplasty or urethral injury is quite high, but there is still no effective way to clinically prevent it at present. The patients who are always in great pain have been trapped in the vicious circle of urethral stricture and dilatation/surgery. The urethral scar tissue is the byproduct of wound repair, it usually means wound healing. However, once the scar tissue overgrows, urethral stricture happens. Nowadays, it has been discovered that urethral stricture tissue contains typical hyperplastic scar. But it is indefinite for the influencing factor of hyperplastic scar in urethral, so there is no effective measure to prevent urethral stricture. In the research of scar formation of skin scar, we find overgrowth and collagen I secretion of fibroblast during agglutination of raw surf