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二穗短柄草BdCDPK4和BdCDPK14基因的克隆、表达分析及遗传转化研究-生物化学与分子生物学专业论文
独创性声明
本人声明所呈交的学 位论文是我个 人在导师指导下 进行的研究工 作及取得 的研究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他 个人或集体已经发表或撰 写过的研究成果 。对本文的研究 做出贡献的个人和集 体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。
学位论文作者签名: 日期: 年 月 日
学位论文版权使用授权书
本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。 本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。
本论文属于
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学位论文作者签名: 指导教师签名:
日期: 年 月 日 日期: 年 月 日
摘 要
植物生长过程中时常会遭受干旱、高盐、极端温度和病虫害等多种多样的非生 物和生物逆境胁迫。通过长期不断的进化,植物形成了一系列特有的调节机制,通 过自身复杂而有条理的信号通路响应不同的逆境胁迫。钙离子是植物信号转导中的 第二信使,在植物生长发育各个阶段的生命活动和响应逆境胁迫中发挥重要作用。 钙依赖蛋白激酶(Calcium-dependent protein kinases,CDPKs)是钙离子信号通路中 的重要成员,已有研究表明,CDPKs 在植物成长发育以及响应胁迫等过程中发挥重 要作用。
二穗短柄草(Brachypodium distachyon L.)因与小麦、大麦等有非常高的同源性, 作为新型禾本科模式生物,吸引了许多研究者。目前关于二穗短柄草中 CDPKs 的研 究鲜有报道。本研究对二穗短柄草 BdCDPK 基因家族的两个成员 BdCDPK4 和 BdCDPK14 进行了初步的研究,主要研究结果如下:
(1) 根据 NCBI 的检索结果设计特异引物,以 cDNA 为模板,克隆了二穗短 柄草 BdCDPK 家族两个成员,并命名为 BdCDPK4 和 BdCDPK14;多序列对比分析 表明,BdCDPK4 和 BdCDPK14 属于 CDPK 家族;
(2) 半定量 RT-PCR 分析发现,BdCDPK4 和 BdCDPK14 基因在根、茎、叶 和颖果中均有表达,在根和叶中表达量较高,在茎和颖果中表达量较低;20% PEG、 低温和热激处理可上调 BdCDPK4 和 BdCDPK14 的表达,而过氧化氢抑制其表达; 高盐处理能显著上调 BdCDPK14 的表达,水杨酸处理下调 BdCDPK4 的表达;
(3) GFP 融合蛋 白表达载 体 pBI121-35S::BdCDPK4-GFP 和 pBI121-35S::
BdCDPK14-GFP 转化洋葱表皮细胞瞬时表达结果显示,BdCDPK4 和 BdCDPK14 主 要定位在细胞质膜上;
(4) 成功构建了两个基因表达载体 pCAMBIA1304-BdCDPK4 和 pCAMBIA 1304-BdCDPK14,并利用农杆菌介导的遗传转化法转化烟草,分别获得了 12 株 BdCDPK4 过表达和 9 株 BdCDPK14 过表达阳性转基因植株。
以上研究结果为进一步阐明 BdCDPK4 和 BdCDPK14 基因在响应逆境胁迫中的
作用奠定了基础。 关键词:二穗短柄草;逆境;CDPK;基因表达;遗传转化
Abstract
During the growth and development processes, plants are constantly challenged by various bio- and abiotic stresses such as drought, salinity, extreme temperatures and pathogen attack. In long time of evolution, plants have developed sophisticated mechanisms to respond and combat with these environmental stresses. Ca2+, as a second messenger in signal transduction pathway, plays important roles during the growth and development processes of plants and in response to stresses. Calcium dependent protein kinases (CDPKs) are
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