斑节对虾Relish基因的克隆及免疫刺激对其mRNA表达水平的影响.PDF

中国水产科学 2013 年 1 月, 20(1): 50−60 Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: 10.3724/SP.J.1118.2013.00050 斑节对虾Relish 基因的克隆及免疫刺激对其 mRNA 表达水平的影响 1,2 1 1,3 1 1 1 1 刘文静 , 杨丽诗 , 李晓兰 , 邱丽华 , 苏天凤 , 杨其彬 , 江世贵 1. 农业部南海渔业资源开发利用重点实验室, 中国水产科学研究院 南海水产研究所, 广东 广州 510300; 2. 上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306; 3. 华南农业大学 动物科学学院, 广东 广州, 510642 摘要: relish 是 Rel/NF-κB 家族的重要成员之一。本研究在构建的斑节对虾(Penaeus monodon)肝胰腺转录组文库中 克隆得到 PmRelish 基因, 其全长 5 112 bp, 包括 3 561 bp 的 ORF, 推测编码 1 个含 1 186 个氨基酸的蛋白。 PmRelish 的蛋白具有Rel/NF-κB 蛋白家族的典型结构特征, 包括 N 端的 RHD 结构域, 核定位信号, C 端的 6 个锚 蛋白重复序列以及死亡结构域, 表明该蛋白是 NF-κB1 亚型。该基因在所检测组织中呈组成型表达, 并在血细胞表 达量最高。使用定量 PCR 检测 PmRelish 基因在不同免疫刺激条件下在肝胰腺中的 mRNA 表达情况, 结果显示, 肝 胰腺 PmRelish 基因是诱导型表达, 并被创伤弧菌、金黄色葡萄球菌和白斑综合征病毒(WSSV)调控表达, 其中被创 伤弧菌上调表达最显著。进一步证明了病毒核酸类似物 Poly(I:C) 、R484 可激活 PmRelish 的表达。上述研究结果 说明 Relish 是斑节对虾的重要免疫因子, 可能通过直接或间接作用参与对细菌和病毒的免疫反应。 关键词: 斑节对虾; relish 基因; 细菌; WSSV; poly(I:C); R484; 表达 中图分类号: S917 文献标志码: A 文章编号: 1005−8737−(2013)01−0050−11 核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB) 被 称为核定位信号 (nuclear localization signal, 是一种重要的核转录因子, 它广泛存在于各种细 NLS) 。NF-κB 在细胞质中与其抑制蛋白 I-κB 结合, 胞中, 能与多种细胞基因启动子或增强子序列 κB 以无活性的状态存在, 当信号传导通路被刺激物 位点发生特异性结合, 进而参与调控这些基因的 激活后, I-κB 蛋白降解, NF-κB 在 NLS 的引导下 转录和表达, 在机体的先天性免疫应答、炎症反 转入细胞核, 并与其激活的特定基因的启动子或 应、细胞增殖和分化、细胞凋亡等重要的病理和 增强子区相结合, 启动基因的转录。Rel/NF-κB 是 生理过程中发挥着重要的作用[1−3] 。 大部分信号转导的中枢, 了解其调控表达机制具 NF-κB 是由 Rel 蛋白家族成员以同源或异源 有重要科学意义。 二聚体形式组成的一组转录因子, 该家族成员均 目前, 在哺乳动物中发现存在的 Rel/NF-κB 在 N 端含有保守的 300 个氨基酸残基左右的 Rel 成员有 RelA(P65) 、c-Rel 、RelB 、P105(NF